柱色谱与薄层色谱.doc

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1、北京科技大学化学系年月日有机化学实验报告院(系)应用科学学院班级化学0602学号40662039姓名王祥柯项目纪律（1分）卫生（1分）操作（3分）结果（3分）报告（2分）小计（10分）得分实验名称包等色谱与柱色谱实验目的和要求1.了解薄层色谱和柱色谱的基本原理及操作技术2.学会用薄层色谱法和柱色谱法分离混合物3.通过绿色植物色素的提取和分离，了解天然物质分离提纯方法；加深了解微量有机物色谱分离鉴定的原理实验原理或反应式色谱法是分离鉴定和纯化有机化合物的重要方法之一。根据操作的不同可以分为柱色谱、纸色谱、

2、薄层色谱、气象色谱及高效液相色谱等类型。1.薄层色谱d1d2d12图2.9—1Rf值计算示意图薄层色谱，可分为吸附色谱和分配色谱。与柱色谱不同的是吸附剂在玻璃板上或塑料板上铺成均匀的薄层（约0.25～1mm厚），用毛细管将样品点在板的一端，将层析板放入流动相（展开剂）中，流动相带者被分离的混合物样品，以不同速度沿板移动。样品不断的被板吸附、又被流动相不断的解吸，由于不同组分被固定相吸附程度不同，在流动相中溶解程度不同，因此，不同组分移动的距离不同，因而形成了互相分离的斑点。在同样实验条件下（吸附剂、流动

3、相、薄层厚度及均匀度等），化合物移动的距离与展开剂移动距离（从原点到溶剂前沿距离）之比值（Rf值）是相同的。即：计算各斑点Rf值，如图2.9—1所示d为点样点到溶剂前沿的距离，d1为点样点到斑点1的距离，d2为点样点到斑点2的距离。北京科技大学化学系年月日利用薄层色谱进行分离、鉴定工作，有灵敏、快速、准确、简单等优点，常常在有机合成实验中，作为跟踪有机反应及判断有机反应完成的程度的手段。它还能特别适用于挥发性小、或在高温下易发生变化而不能用气相色谱分离的物质，还可采用如浓硫酸之类的腐蚀性的显色剂。薄层色

4、谱能否成功，与样品、吸附剂、展开剂及薄层的厚度等因素有关。1、吸附剂的选择吸附剂与柱色谱相同，不同之处是要求更细（一般约200目）。颗粒太大，展开速度太快，分离效果不好；颗粒太细，展开速度太慢，且出现拖尾、斑点不集中的斑点。欲使吸附剂与玻璃板粘接牢，常加入少量粘合剂（如羧甲基纤维素钠，简称CMC—钠、煅石膏2CuSO4·H2O、淀粉等）。加有粘和剂的薄层板叫硬板，没有加粘和剂的薄层板叫软板。常用的吸附层有硅胶和氧化铝两类。其中不加任何粘和剂的以H表示，如硅胶H、氧化铝H；加煅石膏的用G表示，如硅胶G、氧

5、化铝G；加有萤光素的用F表示，如硅胶HF254，氧化铝HF254。加入萤光素是为了显色的方便。薄层层析用的氧化铅也有酸性、中性、碱性之分，也分五个活性等级，选择原则同柱层析。2、展开剂的选择薄层色谱展开剂选择柱色谱洗脱剂的选择相同，极性大的化合物需用极性大的展开剂，极性小的化合物需用极性小的展开剂。一般情况下，先选用单一展开剂如苯、氯仿、乙醇等，如发现样品各组分的Rf值较大，可改用或加入适量极性小的展开剂如石油醚等。反之，若样品的各Rf值较小，则可加入适量极性较大的展开剂展开，在实际工作中，常用二种或三

6、种溶剂的混合物作展开剂，这样更有利于调配展开剂的极性，改善分离效果。通常希望Rf值在0.2～0.8范围内，最理想的Rf值是0.4～0.5之间。3、薄层板的制备薄层板制备的好坏直接影响分离效果，它要求尽量均匀、厚度一致，否则展开时展开剂前沿不整齐，色谱Rf值不易重复。制板方法是：将调和均匀的吸附剂糊状物倒在洗净晾干的玻璃板上，用手持着板的一端轻轻转动或在平台上轻轻振动，使吸附剂均匀流布。板铺好后在室温下晾干，接着是置烘箱中加热、活化。1.柱色谱液-固色谱是基于吸附和溶解性质的分离技术，柱色谱属于液-固吸附

7、色谱。当混合物溶液加在固定相上，固体表面借各种分子间力（包括范德华力和氢键）作用于混合物中各组分，以不同的作用强度被吸附在固体表面。由于吸附剂对各组分的吸附能力不同，当流动相流过固体表面时，混合物各组分在液-固两相间分配。吸附牢固的组分在流动相分配少，吸附弱的组分在流动相分配多。流动相流过时各组分会以不同的速率向下移动，吸附弱的组分以较快的速率向下移动。随着流动相的移动，在新接触的固定相表面上又依这种吸附-溶解过程进行新的分配，新鲜流动相流过已趋平衡的固定相表面时也重复这一过程，结果是吸附弱的组分随着流

8、动相移动在前面，吸附强的组分移动在后面，吸附特别强的组分甚至会不随流动相移动，各种化合物在色谱柱中形成带状分布，实现混合物的分离。柱色谱分离条件⑴固定相选择柱色谱使用的固定相材料又称吸附剂。吸附剂对有机物的吸附作用有多种形式。以氧化铝作为固定相时，非极性或弱极性有机物只有范德华力与固定相作用，吸附较弱；极性有机物同固定相之间可能有偶极力或氢键作用，有时还有成盐作用。这些作用的强度依次为：成盐作用>配位作用>氢键作用>偶极作用>范德华力作用。