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《CALR基因突变在骨髓增殖性肿瘤中的临床研究.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、CALR基因突变在骨髓增殖性肿瘤中的临床研究is［摘要］目的探讨经典的断裂点簇集区/Abelson白血病病毒(BCR/ABL)融合基因阴性骨髓增殖性肿(MPN)患者中钙网蛋白(CALR)基因突变的发生率，分析CALR基因突变阳性MPN的临床特点。方法依据2008年WHO造血组织和淋巳组织肿瘤分类标准对2012年1月〜2015年3月在临沂市沂水中心医院就诊的72例临床初诊为“MPN”患者进行诊断时采用直接测序法检测CALR基因突变，采用等位基因特异性聚合酶链反应(AS-PCR)检测JAK2V617F突变。分析CALR基因突变阳性MPN的临床表现及实验室检查特点。结果在22例真性红细胞增多症
2、(PV)患者中16例携带有JAK2V617F突变(突变率为68%),未检测出CALR基因突变;26例原发性血小板增多症(ET)患者中12例携带有JAK2V617F突变(突变率为46%),8例检测出CALR基因突变(突变率为31%),JAK2V617F突变阴性患者中CALR基因突变率为57%(8/14)；23例原发性骨髓纤维化(PMF)患者中11例携带有JAK2V617F基因突变(突变率为49%),8例检测出CALR基因突变(突变率为35%),JAK2V617突变阴性患者中CALR基因突变为为67%(8/12)。72例患者中均未检测到MPL515突变。结论CALR基因突变是JAK2V617
3、突变阴性的MPN特异性分子标志物。将CALR基因突变检测纳入MPN诊断标准可以提高诊断的准确性减少漏诊率。［关键词］骨髓增殖性肿瘤；CALR基因；JAK2基因；突变［中图分类号］R551.3［文献标识码］A［文章编号］1673-7210(2015)09(b)-0086-04BCR/ABL1融合基因阴性的骨髓增殖性肿瘤(mye1oproliferativemeoplasm,MPN)是一组起源于多能造血干细胞的恶性肿瘤，表现为骨髓细胞一系或多系过度增殖，包括真性红细胞增多症(polycythemia,PV)、原发性血小板增多症(essentialthrombocthemia,ET)＞原发性骨
4、髓纤维化(primarymyelofibrosis,PMF),临床上有发生动静脉血栓、髓外造血、骨髓纤维化、甚至向白血病转化［1-2］oJAK2V617F突变见于97%的PV,50%〜60%的ET及PMF患者［3］。MPL515基因突变可见于3%〜5%的JAK2V617F突变阴性的ET及PMF患者［4］。自2005年JAK2V617F和MPL515突变相继被发现并纳入WHO诊断标准，该突变的发现改变了MPN的诊断和分类，从分子的角度诠释了MPN的发病机制。但仍有40%的ET及PMF患者未检测到JAK2V617F基因突变，最近研究发现CALR见于JAK2V617F阴性的ET及PMF患者，本
5、研究对临床初诊MPN患者进行了JAK2V617F.CALR及MPL515基因突变分析，现报道如下：1资料与方法1.1一般资料选择2012年1月〜2015年3月在临沂市沂水中心医院就诊的72例初诊MPN患者。其中PV23例，男11例，女12例，年龄38〜72岁；ET26例，男12例,女14例,年龄25-80岁；PMF23例，男16例,女7例，年龄39〜76岁。所有患者均经医院伦理委员会批准并签署知情同意书。1.2检验指标对患者临床资料、骨髓和外周血涂片、骨髓活检进行分析，按照WHO造血和淋巳组织肿瘤分类标准（2008）进行诊断。1.3方法CALR基因突变分析：用血液基因组DNA提取试剂盒（
6、QIAampDNAMiniKit,生产商：Qiagen公司）提取骨髓细胞基因组DNA,CALR9号外显子PCR扩增引物（生产商：Invitrogen公司；使用浓度:5.0pmol/nL；贮存条件：干粉于-20°C保存，工作液于4°C保存；有效期：-20C为1年，4°C为半年），设计序列：引物名称：CALR-X9-Fwd,引物序列：FAM-CTGGTCCTGGTCCTGATGT；引物名称：CALR-X9-Rev,引物序列：TCTCACAGAGACATTATTTGGCoPCR体系包括DNA50〜100ng,2XTaqPCRMasterMix（TIANGEN公司产品）15uL,正反向引物各0.
7、5PL,加去水离子补足体系至30uLo反应条件：98°C预变性3min,98°C变性10s,63°C退火30s,72°C延伸30s,共29个循环，72。C延伸5min。PCR扩增产物经回收、纯化后实验数据采用片段分析软件GenemapperidV4.1进行分析，分析示例见图1。2结果2.172例MPN患者临床及实验室检查特点根据2008年WHO分型诊断标准，PV22例、ET26例、PMF23例、MPN-u1例。所有患者均接受常规治疗
