雷公藤内酯醇抑制炎性单核细胞诱导Th17细胞分化的研究.pdf

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1、实用医学杂志2015年第31卷第l1期1763雷公藤内酯醇抑制炎性单核细胞诱导Thl7细胞分化的研究何敏张秀娟彭按平柯培锋徐建华黄宪章庄俊华摘要目的：构建脂多糖诱导的人单核细胞活化模型，观察雷公藤内酯醇(rⅡyI')对其产生前列腺素2(PGE2)的影响。进一步探讨调控11h17细胞分化的机制。方法：分离正常人外周血单核细胞，经脂多糖预处理活化后。加入不同浓度的TP，r进行干预，qRT．PCR检测环氧化酶(COX)mRNA表达水平，ELISA检测上清中PGE2的水平：将不同组别的单核细胞与自体CD4T细胞进行混合淋巴细胞培养，并用流式细胞术在单个细胞水平上检测产生IL．17和IF

2、N．的T细胞亚群。结果：Ⅱyr呈剂量依赖性地抑制COX．2的mRNA表迭以及PGE2的分泌(P<0．05)，T细胞亚群分析的结果表明，TPT处理组单核细胞能够抑制1’hl7细胞的分化．而添加外源性的PGE2能够部分回复17细胞的比例。结论：TP，r可以抑制活化单核细胞分泌PGE2。进而影响17细胞的分化。关键词雷公藤内酯醇；Th17细胞；单核细胞；脂多糖Thl7细胞是一类新发现的辅助性T细胞亚1材料与方法群．特征性地分泌白细胞介素(IL)．17等细胞因子，具有很强的促炎症作用，与多种自身免疫病的发1．1主要试剂和药物淋巴细胞分离液购自Axis—生和发展相[。Th17细胞的分化受

3、抗原的性质、局ShildPoCAS公司；人naiveCD4+T细胞、CD14+单部环境等多种因素的调控，其中细胞因子的种类核细胞磁珠分选试剂盒购自美天旎公司：二甲基和细胞因子之间的平衡对其分化具有重要的调节亚砜(DMSO)购自Ameresco公司；细胞培养试剂等作用。相关试剂购自Invitrogen公司：逆转录试剂盒购自雷公藤内酯醇(triptolide，T)是从中药雷公Fermentas公司；荧光定量PCR试剂盒购自Takara藤中提取出来的二萜内酯化合物，是雷公藤的主公司；胞内染色试剂盒购自eBiosciences公司；抗要活性单体之一。临床上广泛应用于抗炎、镇痛、人CD4

4、、IL-17和IFN．^y流式抗体购自BDBiosciences抗免疫排斥与自身免疫病的治疗[z-。然而，国内外PharMingen公司；人PGE2EHSA试剂盒购自R&D研究T的作用机制主要集中在对淋巴细胞分Systems公司；佛波酯(phorbolmyristateacetate．化和活化的直接作用，而对Thl7分化微环境的PMA)、脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)、离子霉素报道较少。巨噬细胞(M‘p)是一类重要的抗原递(ionomycin)、莫能霉素(monensin)、PGE2和T均呈细胞。在自身免疫性疾病和肿瘤中能够与Thl7购自Sigma公司。

5、T用DMSO溶解。临用前用细细胞相互作用．上调IL一17A的产生。因而在rI’hl7胞培养液稀释至工作浓度。DMSO的终浓度低于细胞的分化过程中起到关键作用[。前列腺素E20．01％。(prostaglandinE2，PGE2)是一种前列腺素化合物，1．2实验方法参与机体多种生理及病理过程。新近研究表明它1．2．1外周血单核细胞和CD4~T细胞的分离是又一促进Thl7细胞分化的重要细胞因子。本研取新鲜采集的健康志愿者外周血，用淋巴细胞分究拟观察T对脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)离液常规分离外周血单个核细胞(PBMC)。然后诱导的人单核细胞表达PGE2的影

6、响，进而探讨其用分别用磁珠分选的方法分离外周血CD14+单核对Thl7细胞分化的作用，试图为阐述其免疫抑制细胞和CD4T细胞，具体操作步骤按照试剂说作用提供实验依据。明书进行，分选后的细胞用流式细胞术检测其纯度，CD14+单核细胞与CD4+T细胞纯度均>95％doi：10．39694．issn．1006-5725．2015．11．0101．2．1雷公藤内酯醇干预炎性单核细胞将纯化基金项目：广东省高校优秀青年创新人才培养计划资助项目(编的CD14+单核细胞用含10％AB血清的DMEM培号：2010KT004)；广州中医药大学优秀青年基金(编号：2012KT1479)作者单位：51

7、0120广州市，广东省中医院检验科(何敏，彭桉养液调整细胞浓度为1×106／mL．将细胞悬液按照平，柯培锋，徐建华，黄宪章，庄俊华)，肝病科(张秀娟)2mL／~L接种于l2孔板。加入LPS(10ng／mLLPS)实用医学杂志2015年第31卷第11期预处理6h以后，分别加入0、2．5、5、10nmol／L的结果表明LPS能诱导单核细胞分泌PGE2。但是TPT进行干预。24h后，收集细胞提取mRNA用于TPT从2．5nmol／L浓度开始，就能抑制活化单核细qRT．PCR检测：同时收集上清液，酶