单细胞聚团拟胚体形成诱导人多能干细胞造血分化的技术优化.pdf

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1、中国医药导报2015年6月第l2卷第16期·论著·单细胞聚团拟胚体形成诱导人多能干细胞造血分化的技术优化徐鉴城段永娟孙仪杨洋胡晓中国医学科学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室，天津300020【摘要】目的优化利用单细胞聚团拟胚体(Spin-EB)培养诱导人多能干细胞造血分化的方式。方法采用AggreWellTM800及v一96孔板两种培养板形成Spin—EB，在骨形成蛋白一4(BMP一4)、血管内皮生长因子(VEGF)及碱性成纤维生长因子(bFGF)组合培养基中诱导造血分化，通过流式细胞术检测不同分化条件下CD34+细

2、胞的比例；选取CD34+细胞比例高的拟胚体(EB)形成方式，并通过造血集落形成实验及红细胞分化培养实验，验证EB来源的CD34+细胞的造血集落形成和红系分化能力。结果流式分析结果显示，在AggreWellTM800培养板中培养所得的EB．其CD34+造血干祖细胞比例为22．6％，V一96孔板按照形成EB的细胞数目，CD34+造血干祖细胞比例分别为：3000个细胞／孑L为10．8％、6000个细胞／孑L为1．28％、9000个细胞／孑L为1．23％。胚胎干细胞(ESC)来源的CD34+细胞形成的集落与脐带血CD34+造血干祖细胞形成的

3、集落形态相似，并且在红系分化培养体系中分化为CD71+CD235a+的红细胞。结论V一96孔板组EB形成和CD34+分化效率与用于EB形成的细胞数有相关性，3000个细胞／孑L条件相对最优。采用AggreWellrM800培养板形成EB及EB的造血分化效率均高于各组V一96孔板分化效率。【关键词1胚胎干细胞；拟胚体；造血分化【中图分类号】R329【文献标识码】A【文章编号】1673—7210(2015)06(a)一0009—05TechniquesoptimizationsofSpin-embroidbodyapproachforh

4、ematopoi-eticdiferentiationofhumanpluripotentstemcellXUJianchengDUANYon~uanSUNYirANGYangHUXiaoStateKeyLaboratoryofExperimentalHematology，InstituteofHematologyBloodDiseasesHospitalofChineseAcade-myofMedicalSciences，Tianjin300020，China[Abstract]ObjectiveTooptimizehematop

5、oieticdifferentiationofhumanpluripotentstemcellsviaspin—embryoidbodyfSpin—EB)．MethodsAggreWellTM800andV-96wellcultureplatewereusedtoformSpin-EB，whichwassucces—sivelyinducedtohematopoieticdifferentiationinculturemediumcontainedBMP一4，VEGFandbFGF．Flowcytometrywasusedtoana

6、lyzetheproportionofCD34+hematopoieticstem／progenitorcellsunderthetwodifferentculturecondi-tions．Thehighertestwasseletedtoverifyitscolonyformingabilityanderythroiddifferentiationabilityviacolonyformingunitassayanderythroiddifferentiationculturesystem．ResultsTheflowcytom

7、etryresultsshowedthatthepro—portionofCD34+hematopoieicstem／progenitorcellsfromAggreWellTM800testwas22．6％．whiletheV一96welltestdi-videdintothreetestsaccordingtothenumberofESC，thecorrespondingproportionwere：3000cells／wellwas10．8％，6000cells／wellwas1．28％，9000cells／wellwas1．

8、23％．ThemorphologyofthecolonyformingunitfromCD34+cellsO—riginatedfromembryonicstemcell(ESC)wasassimilarastheumbilicalc