感染新型鸭呼肠孤病毒的番鸭肝脏蛋白质组双向电泳方法的建立-论文.pdf

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1、中国虐学c亟强2013，29(26)：19—24ChineseAgriculturalScienceBulletin感染新型鸭呼肠孤病毒的番鸭肝脏蛋白质组双向电泳方法的建立黄梅清，朱果真，陈仕龙，郑敏，程晓霞，陈少莺(福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心，福州350013；福建省农业科学院畜牧兽医研究所，福州350013；福建农林大学动物科学学院，福州350007)摘要：为建立感染新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)~番鸭肝脏蛋白质组双向电泳(2一DE)方法。本研究通过对人工感染NDRV的雏番鸭肝脏病变的观察，对肝脏蛋白质提取裂解液的配方、样品上样量、一向等电聚

2、焦(IEF)参数等条件的对比和优化，建立了有效的番鸭肝脏2-DE方法。结果表明：采用攻毒后病变最典型的第5天的番鸭肝脏作为研究样品；采用研磨．超声一裂解液(7mol／L尿素、2mol／L硫脲、4％CHAPS、65mmol／LDTT、40mmo1／LTris—base、0．5％IPGbuffer)法提取肝脏蛋白质，结合2Dclean—upkit以及去拖尾DeStreak试剂纯化蛋白，按1100ug上样，设置IEF参数为：50V12h、200V1．5h、500V1h、1000V1h、8000V3h、8000V60000Vh、500V维持，采用胶体考马斯亮蓝

3、染色，能获得分辨率高、重复性好的2-DE图谱。应用建立的2-DE方法和PDQest8．0分析软件，发现26个与正常番鸭肝脏蛋白表达水平超过3倍的差异蛋白点。该方法的建立为进一步寻找NDRV感染宿主组织相关蛋白以及水禽呼肠孤病毒差异蛋白质组学研究提供了技术支持。关键词：番鸭；肝脏；蛋白质组；新型鸭呼肠孤病毒中图分类号：$852．65文献标志码：A论文编号：2013．1350EstablishmentofTwo-dimensionalElectrophoresisforProtemeofLiverfromMuscovyDuckExperimentallyI

4、nfectedwithNorvelDuckReovirusHuangMeiqing‘，ZhuGuozhen，ChenShilong一，ZhengMin，ChengXiaoxia一，ChenShaoying，(FujianAnimalDiseasesControlTechnologyDevelopmentCenter，Fuzhou350013；2[ustituteofAnimalHusbandryandVeterinaryMedicine，FujianAcademyofAgriculturalSciences，Fuzhou350013；Collegeof

5、AnimalScience，FujianAgriculturalandForestryUniversity，Fuzhou350002)Abstract：TheaimwastoestablishanefficientTwo—DimensionalElectrophoresis(2一DE)ptotocolforproteomicmethodofliversfrommuscovyduckswhichwereexperimentallyinfectedwithNorvelDuckReovirus(NDRV)．Theconditionswhichincluded

6、thereagentofLysisbuffer，amountofloadedproteinandparametersofIsoelectricFocusing(IEF)werecomparedandoptimized．Thepathologicalchangesinliversweresimultaneouslyobserved．Theresultsshowedthattheliverswithcharacteristicpathologywerechosentobethesamples．whichwerefrommuscovyducksatthefi

7、fthdayafterinoculatedwithNDRV．Thehigh—resolutionandgood—repeatability2-DEimageswereobtainedwith1100gofliverproteinsampleswhichwereextractedbyLysis—buffer，purifiedby2Dclean-upkit，separatedby2一DEundersuitableelectrophoresisparameters，andstainedwithcolloidalCoomassiebrilliantblueG一

8、250solution．AnalyzedwiththesoftwarePDQest8．0，26