shRNA下调BAG-I表达降低肺癌A549细胞对顺铂的耐药性-论文.pdf

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1、中国肿瘤生物治疗杂志http：／／www．biother．orgChinJCancerBiother，Dec．2013，Vo1．20，No．6·706·DOI：10．3872／j．issn．1007-385X．2013．06．013·基础研究·shRNA下调BAG．表达降低肺癌A549细胞对顺铂的耐药性刘洋，刘志良，哈敏文，王亚帝(辽宁医学院附属第一医院胸外科，辽宁锦州121001)[摘要]目的：通过载体介导的shRNA下调BAG—基因(Bcl一2associatedathanogene-1)表达，探讨其对肺癌A549细胞顺铂(cisplatin，DDP)耐药

2、性的影响。方法：构建靶向BAG—的shRNA干扰载体pGCsi—BAG一1，稳定转染A549细胞。实验组使用稳定转染pGCsi—BAG一1的细胞株(BAG一1一shRNA)，阴性对照组使用无关序列质粒转染的细胞株(SC—shRNA)，对照组使用未转染的亲本A549细胞株(Contro1)。Westernblotting检测pGCsi—BAG一1转染对A549细胞BAG一1、Bcl一2表达的影响。MTr法、流式细胞术分别检测pGCsi—BAG一1转染对DDP处理后A549细胞的增殖和凋亡的影响。结果：成功构建稳定干扰BAG—J表达的A549细胞株，BAG一1．s

3、hRNA组细胞中BAG一1和Bcl2蛋白表达显著低于SC—shRNA组和对照组(均P<0．05)。随DDP(2．5～40m1)浓度增加，各组细胞增殖抑制率也随之升高，DDP浓度为2．5ml时，BAG一1一shRNA组A549细胞的增殖抑制率即显著高于SC—shRNA组和对照组[(22．264-4．89)％(10．07±3．82)％，(8．12±4．09)％，均P<0．05]。与SC—shRNA组和对照组相比，DDP(2．5m1)处理24h后，BAG一1一shRNA组凋亡率显著升高[(37．84±3．62)％(16．80±2．81)％、(17．10±3．11)％

4、，P<0．05]。结论：下调BAG—表达可抑制DDP作用下的A549细胞的增殖并促进其凋亡。[关键词]BAG—基因；肺癌；A549细胞；顺铂；耐药[中图分类号]R734．2；R730．5；R730．53[文献标志码]A[文章编号]1007—385X(2013)06-0706-05ReductionofcisplatinresistanceoflungcancerA549cellsthroughdown·-regula·-tingtheexpressionofBAG-1mediatedbyshRNALiuYang，LiuZhiliang，HaMinwen，Wan

5、gYadi(Thoracicsurgery，TheFirstHospitalAfiliatedtoLiaoningMedicalSchool，Jinzhou121001，Liaoning，China)[Abstract]Objective：TodetectdownregulationoftheexpressionofBAG—JgeneinlungcancerA549bytransfeetedavectorcontainedshRNA，andtoinvestigateitseffectsonthecisplatin(DDP)resistanceofA549cel

6、ls．Methods：Inter—ferencevectorpGCsi—BAG一1targetBAG—wasconstructedandstabletransferredintoA549cells．CellsstabletransferedbypGCsi-BAG—wereusedasanexperimentalgroup(BAG——shRNA)，cellstransferredbynon—sensevectorwereusedasanegativecontrolgroup(SC—shRNA)，andtheparentA549cellswereusedasaco

7、ntrolgroup．WesternblottingwasperformedtodetecttheeffectofpGCsi—BAG—ltransfectionontheBCL-2andBAG—lexpressionofA549cells．MTYmeth—odandfloweytometrywasusedtodetecttheinfluenceonproliferationandapoptosisofA549cellsafterDDPtreatment．Results：AnA549celllinewhereBAG—Jwasstablyinterferedwas

8、successfullyconstru