河南省周口地区瓜类白粉病的分子鉴定与分析

《河南省周口地区瓜类白粉病的分子鉴定与分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、第47卷第6期华中师范大学学报(自然科学版)Voi．47NO．62013年12月JOURNAIOFHUAZH()NGNORMALUNIVERSITY(Nat．Sci．)Dec．2013文章编号：1000一n90(ZOlS)06．0％0一O6河南省周口地区瓜类白粉病的分子鉴定与分析张怡，徐克东，陈佩佩，段素娟，孟娉，乔月娥，李成伟(周口师范学院植物遗传与分子育种重点实验室，河南周口466000)摘要：对河南周I=1地区的瓜类白粉病进行了分子鉴定及分析．分别对黄瓜、甜瓜、葫芦、南瓜白粉病菌进行了扫描电子显微形态观察、核糖体DNA转录间隔区(ITS)克隆、测序及进化

2、树分析．结果表明，周口地区的4种瓜类白粉病菌属于Sphaerothecafuliginea，系统进化发现瓜类白粉病菌与豆类、美女樱、水母柱树白粉病菌种间差异小，同时发现该地区的瓜类白粉病菌与美洲、日本、澳大利亚、英国白粉病亲缘关系比较近，推测瓜类白粉病菌的进化与地域没有直接关系，而是与其自身的小种进化有关．关键词：瓜类白粉病菌；分子鉴定；转录间隔区；进化树中图分类号：Q938文献标识码：A瓜类白粉病是一种世界性病害，在中国每年都进化树分析，为瓜类白粉病菌的鉴定分类、系统进因此病害造成大量减产[1]．单囊壳白粉菌(Spha—化和防治奠定理论基础．erotheca

3、fuliginea)和二孢白粉菌(Erysipheci—1材料与试剂C／Zoracearum)是瓜类蔬菜白粉病的主要病原菌[，前者比后者更为常见J．瓜类白粉病在我国各地1．1试验材料的保护地和露地各种瓜类上普遍发生．黄瓜、葫芦、黄瓜、甜瓜、葫芦、南瓜白粉病病菌植株均取自甜瓜、南瓜受害较重，冬瓜和西瓜次之，丝瓜抗病性周口师范学院校园．较强．此病一旦发生，扩展蔓延很快，给生产造成巨1．2主要试剂及仪器大损失，一般年份减产l0左右，流行年份减产高2xTaqMasterMix购自北京康为世纪生物科达20～4O．技有限公司，琼脂糖凝胶回收试剂盒购白北京索莱传统方法通常利

4、用病菌的显微形态对真菌进宝生物科技有限公司，标准的分子量Marker购自东行小种鉴定和分析．随着分子技术的发展，rDNA盛生物科技有限公司，其它试剂均为国产试剂．序列非转录区的核糖体DNA转录间隔区序列(in—2KoCTAB抽提液：100mmolTrisHC1ternaltranscribedspacer，1TS)被广泛应用于真菌(pH8．O)，20mmolEDTA(pH8．0)，1．5tool小种及进化程度的研究．真菌核糖体基因是由NaCl，2CTAB(V／)，4PVP40(W／V)，高压18S、ITS1、5．8S、ITS2和28S头尾串联构成的重灭菌，使用

5、前加入2J3一巯基乙醇(V／V)；1()复序列．18S、5．8S和28SrDNA属于转录区，与它CTAB抽提液：100mmolTris～HC1(pH8．0)，20们相比较，ITS1和ITS2作为非编码区承受的进化mmo[EDTA(pH8．0)，1．5toolNaC1，10选择压力小，相对变化较大，在种问表现出较高的CTAB(W／V)，4PVP40(W／V)，高压灭菌，使用差异，具有广泛的保守性和特异性，设计特异性引前加入2J3一巯基乙醇(V／V)；二氨基联苯胺(Dia—物克隆该序列用于植物病原菌的鉴定、检测、病害minobenzidine。DAB)染色液(1m

6、g／mI)：溶解诊断及防御等，已成为国际上广泛使用的分子生物100mgDAB于100mI水中(pH3．8)；固定液学方法．(无水乙醇：冰乙酸一3：1)；台盼兰染液：用鉴此针对在河南周口市发现大面积的瓜类白0．85的生理盐水配制成0．3的台盼兰染液；水粉病菌，对其进行显微形态学观察、ITS序列鉴定、合三氯乙醛(2．5g／mL)：溶解250g氯乙醛于收稿日期：2013-0508．基金项目：国家自然科学基金项目(31071807，31272168)*通讯联系人．Email：lichengwei@zknu．edu．Cr1．第6期张怡等：河南省周口地区瓜类白粉病的分子鉴

7、定与分析831100mL水中．种白粉病菌ITS扩增体系均为：DNA模板2FL，扫描电子显微镜为FEI公司的Quanta200型ITS12L，ITS42L，Mix10I，ddH2O41．产品，PCR仪为Biometra公司T1型产品．PCR反应条件：预变性94℃，5min；变性94℃，30S，退火48℃，45S，延伸72~C，45S，35个循环；2试验方法再延伸72℃，5rain．2．1白粉病菌的形态观察取6LPCR产物电泳，进行1．2琼脂糖凝2．1．1显微形态观察对染病叶片的菌落颜色、大胶电泳，溴化乙锭染色，在凝胶成像系统下检测结小、形状进行普通观察，以及使用

8、DAB和台盼兰果．将所得到的目的条带经