三痹颗粒对 CIA 模型大鼠血清 CXCR3、CXCR4mRNA 的影响-论文.pdf

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1、中医药学报2014年8月第42卷第4期·58·ActaChineseMedicineandPharmacologyVo1．42，No．4，Aug．2014三痹颗粒对CIA模型大鼠血清CXCR3、CXCR4mRNA的影响．张春芳，汪洋，王炎焱，赵志诚，客蕊，陈会君，徐峰(黑龙江中医药大学附属第一医院，黑龙江哈尔滨150040)摘要：观察三痹颗粒对Ⅱ型胶原诱发类风湿关节炎(CIA)模型大鼠病变关节细胞趋化因子受体的影响，探讨其抗炎作用机制。方法：将CIA模型大鼠随机分为模型组、三痹颗粒高剂量组、三痹颗粒中剂量组、

2、三痹颗粒低剂量组、另取空白组。三痹颗粒高、中、低剂量组于初次免疫第l5天分别给予三痹颗粒蒸馏水溶液灌胃，模型组和空白对照组灌服同体积的生理盐水，连续灌服20天，观察大鼠足踝关节肿胀度以及关节炎指数的变化，RT—PCR法测定大鼠外周血趋化因子受体3(CXCR3)、趋化因子受体4(CXCR4)mRNA含量。结果：第21天，与空白组比较，模型组及三痹颗粒各组足容积明显增大，差异有统计学意义(尸<0．05)；第35天时，与模型组比较，三痹颗粒高、中剂量组足容积的上升程度减慢，进一步减轻关节炎症反应程度，差异有统计学意

3、义(P<0．05)。与模型组比较，中药各剂量组大鼠关节炎评分指数明显降低，差异有统计学意义(P<0．05)。与模型组比较，三痹颗粒各组大鼠外周血CXCR3mRNA、CXCR4mRNA的表达明显降低，差异有统计学意义(P<0．05)。结论：三痹颗粒能够抑制CIA模型大鼠外周血CXCR3、CXCR4的表达，从而减慢CIA模型大鼠足容积的上升程度，降低关节炎指数，抑制炎症反应。关键词：三痹颗粒；CIA模型大鼠；CXCR3；CXCR4中图分类号：R285．5文献标识码：A文章编号：1002—2392(2014)04—

4、0058—03类风湿关节炎(RA)是一种以关节滑膜炎症及关三痹汤，由细辛、桑寄生、独活、秦艽、桂枝、川芎、节周围组织慢性炎症病变为主要病理表现的慢性全身杜仲等十六味中药物组成，购自于黑龙江省药材公司，自身免疫性疾病。三痹颗粒是临床治疗RA行之有效制备成粉末，每克粉末含6．2g生药。的方剂，由《妇人大全良方》三痹汤化裁而来，由独活、1．3实验试剂秦艽、桂枝、杜仲、黄芪等16种药材组成，善治手足拘(~Trizol；②逆转录酶试剂盒；③Taq酶。④PCR挛、风痹、气痹等疾，前期研究表明_1-2]，三痹汤可通过Mar

5、ker；⑤免疫级牛Ⅱ型胶原；⑥弗氏完全佐剂；⑦引负调节关节滑膜组织内MMP一3、明胶酶B的表达及物鼠CXCR3：上游引物：5一GGAGCTGCTCAGAGTA．血清中TNF—Ot及IL一1含量，明显减轻足跖肿胀度，AATCAC一3，下游引物：5一GCACGAGT—发挥其抗炎作用。本研究以胶原诱导性关节炎(CIA)CACTCTCGTITYC一3；鼠CXCR4上游引物：5一大鼠为模型，观察三痹颗粒的抗炎作用机制，为三痹颗AGAAccAGCGTrACCATGGA一3，下游弓I物：5一粒治疗炎性关节炎提供实验基础。G

6、AGTGTGACAGCTFGGATG一3；B—actin：上游弓I物：1材料5一AAGTCCCTCACCCTCCCAAAAG一3，下游弓I物：5一1．1实验动物AAGCAATGCTGTCACCTFCCC一3。健康Wistar大鼠，6～8周龄，雌雄各半，体质量1．4主要仪器(180±20)g。①恒温水浴箱；②cR21型低温高速离心机；③Ep．1．2实验药物pendofl00型DNA热循环仪；④DU640型蛋白质核酸分析仪；~TM一26型数字凝胶成像系统收稿日期：2014—04—21修回日期：2014—05—15

7、2实验方法基金项目：2011年度黑龙江省教育厅课题(11551463)2．1CIA大鼠模型制备作者简介：张春芳(1972一)，女，博士，副主任医师，主要从事中医药治将10mg牛Ⅱ型胶原与5mL冰醋酸溶液混匀，加疗内科疾病机制研究。入卡介苗的弗氏完全佐剂，浓度为3．5mg／mL，等体积2014年8月第42卷第4期中医药学报Vo1．42，No．4，Aug．2014AetaChineseMedicineandPharmacology·59·混合含有CII的冰醋酸与弗氏完全佐剂(CFA)，研磨表1三痹颗粒对CIA大鼠

8、足容积的影响至乳白色黏稠液体，胶原浓度为1g／L。第1天在大鼠尾根部、背部3点皮内注射，总量0．3mL。第2l天时用浓度为1mg／mL的Ⅱ型胶原乳剂按上述方法和剂量再次重复免疫。2．2实验分组与给药方法注：与空白组比较，P<0．05；与对应模型组比较，P<0．05。将模型制备成功的84只大鼠随机分为模型组、三第21天，与空白组比较，模型组及三痹颗粒各组痹颗粒高剂量组、三痹颗粒中剂量组、三痹颗粒低剂量