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《利用TALEN技术在牛胎儿成纤维细胞中敲除Myostatin基因-论文.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、遵付Hereditas(Beijing)2014年7月,36(7):685-690www.chinagene.crl研究报告利用TALEN技术在牛胎儿成纤维细胞中敲除杨翠翠,佟慧丽,马兴红,杜巍,刘丹,杨宇,严云勤东北农业大学生命科学学院,哈尔滨150030摘要:肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)基因能够负向调节骨骼肌的生长和发育,牛MSTN基因突变会出现“双肌”特征。文章利用转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)靶向敲除牛胎儿成纤维细胞的MSTN基因,获得敲除MSTN基因的细胞系,为制备M
2、STN基因敲除牛提供材料。构建一对MSTN基因的TALENs真核表达载体,分别采用PEI转染试剂和电穿孔法进行牛胎儿成纤维细胞的转染,测序结果表明TALEN技术可用于敲除牛MSTN基因,利用T7核酸内切酶I(T7EI)检测其突变效率,结果显示电穿孔转染的敲除效率为20.4%。通过有限稀释法,共获得10个MSTN基因敲除的细胞克隆(包括MSTAr和MSTN+),其靶位点敲除的碱基数分别是120不等,部分会出现移码突变。出现移码突变的细胞系可用于MSTN基因敲除的转基因肉牛的制备关键词:TALENs;牛;Myo
3、statin;敲除;转染MyostatinknockoutinbovinefetalfibroblastsbyusingTALENCuicuiYang,HuiliTong,XinghongMa,WeiDu,DanLiu,YuYang,YunqinYanCollegeofLifeScience,NortheastAgriculturalUniversity,Harbin150030,ChinaAbstract:Myostatin(MSrN)cannegativelyregulatethegrowthandde
4、velopmentofskeletalmuscle,andmutationsofbovineMSTNgeneCancausea“double-muscle”featureToknockoutMsgeneinbovinefetalfibroblastbytranscrip—tionactivator-likeeffectornucleases(TALENs)andobtainMSTNknockoutcelllines,weconstructedonepairofMSTN.TALENvectorandtrans
5、fectedintobovinefetalfibroblastcellsbyPEIandelectroporation.SequencingresultsdemonstratedthatTALENwasavailableforMSTNknockout.T7endonuclease1(T7E1)wasusedforthedetectionofmu-tationefficiency.Theresultsindicatedthatknockouteficiencyofelectropomtiontransfe:o
6、rionwas20.4%,and10MSTN+/‘andMSTAr/‘cel1colonieswereobtainedvialimitingdilutionmethod.Thedeletionnumberofnucleotidesrangedfrom1to20,andsomeofthemwereframeshiftmutation,whichcouldprovidethepossibilityinproductionofMSTNknockoutcattleinthefuture.Keywords:TALEN
7、s;bovine;Myostatin;knockout;transfection收稿El期:2013-12—16;修回日期:2014—03—29基金项目:国家转基因专项(编号:2011ZX08007.002)资助作者简介:杨翠翠,硕士,专业方向:分子克隆与基因敲除。E.mail:806344748@qq.com通讯作者:严云勤,教授,博士生导师,研究方向:转基因动物。E-mail:yanyunqin@sohu.tomDOI:10,3724/SEJ.1005,2014,0685网络出版时间:20146.416
8、:11:41URL:http://www.cnki.net/kcms/detail/11.1913.R.20140604.1611.001.html686遗Hereditas(Beijing)2014第36卷肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)属于TGF—B1材料和方法超家族,通过控制成肌细胞的大小、数量和增殖速1.1材料度来实现对肌肉生长的负调控】。MSTN在肌肉组织中特异性表达,其活性的丧失或降低均
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