乌江网箱养殖加州鲈鱼致病病原的分离与鉴定-论文.pdf

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1、贵州农业科学2014，42(5)：15O～153GuizhouAgriculturalSciences[文章编号]1001—3601(2014)05—0282—0150—04乌江网箱养殖加州鲈鱼致病病原的分离与鉴定魏志琴，杨秀荣，曾燕玲，宋培勇(遵义师范学院生命科学学院，贵州遵义563002)[摘要]为探明乌江网箱养殖加州鲈鱼的致病病原，采用营养琼脂培养基分离纯化，用传统分类和16SrRNA基因序列分析方法，对其进行了分离与鉴定。结果表明：共分离出4个菌株(I～IV)，各菌株均扩增出1条约1500bp片段，与目的片段大小一致；菌株I和菌株Ⅱ为溶酪巨球菌(Macrococcuscaseoly

2、ticus)，菌株Ⅲ为鲁氏不动杆菌(Acinetobacterlwo厂=i)，菌株Ⅳ为西伯利亚微小杆菌(Exiguobacteriumsibiricum)。经回接感染试验，4株细菌均能引起加州鲈鱼患病。[关键词]加州鲈鱼；网箱养殖；可疑病病原菌；分类鉴定；回接试验；乌江[中图分类号]$941．42[文献标识码]AIsolationandIdentificationofPathogenicBacteriaIsolatedfrOmMicropterussalmonidesCulturedinNetCageinWujiangRiverWEIZhiqin，YANGXiurong，ZENGYanli

3、ng，SONGPeiyong(SchoolofLifeScience，ZunyiNormalCollege，Zunyi，Guizhou563002，China)Abstract：InordertostudythepathogenofinfectiousM．salmonidesculturedinnetcageinWujiangRiver。theauthorsconductedanidentificationtothesuspiciouspathogenicbacteriaisolatedbyintegratedmethodofthetraditionalclassificationofmi

4、croorganismsand16SrRNAgenecomparisonanalysis．Results：Fourstrainswereisolatedwitha1500bpfragment，whichwasofthesamesizewithtargetfragment．IsolatesIandII，IIIandIVwereMacrococcuscaseolyticus，AcinetobacterlwoffiiandExiguobacteriumsibiricum，respectively．Itprovedthatallthefourisolateswerecapableofcausing

5、thefish(Micropterussalmonides)diseasebyreinoculationtest．Keywords：Micropterussalmonides；cultureinnetcage；suspiciouspathogenicbacteria；classificationandidentification；reinoculationtest；WujiangRiver加州鲈鱼(Micropterussalmonides)属鲈形目，分离菌株采用形态学和生理生化特征以及16S太阳鱼科，原产于美国密西西比河。我国1983年引rRNA基因PCR扩增测序进行了分类鉴定，并进行进

6、，1985年人工繁殖获得成功口]。由于加州鲈鱼具了回接感染试验，以期为乌江网箱养殖加州鲈鱼病有生长快、肉鲜味美、易于养殖、经济效益高等特点，害的防治提供依据。现已成为乌江网箱养殖重要的鱼类品种之一。然1材料与方法而，随着工、农业发展和人口增长，每年均有大量的工业废水和生活污水流人乌江，使乌江水质变差，鱼1．1材料病频繁发生，严重影响了养殖户的生产积极性。之1．1．1患病加州鲈鱼患病加州鲈鱼(标本)，6前对未知病原菌(细菌或真菌)的分类鉴定多采用形尾。于2008年4月采自乌江上游主要支流中的偏态学和生理生化特征为依据，随着现代分子生物学岩河养殖场(遵义县境内)，采集时标本材料个体病的发展，尤

7、其是PCR技术、测序技术和国际基因数征相似。其中，2尾加州鲈鱼病症为烂鳃、烂鳍，体据库的建立，rRNA与rDNA作为分子指标广泛应表发红；4尾加州鲈鱼病症为烂鳃、烂鳍，体表、肠发用于细菌遗传特征和分子差异研究¨2]。大量已知细红，肠道出血。菌或真菌的rRNA基因数据已被测定并输入了国1．1．2健康加州鲈鱼健康加州鲈鱼共计160际基因数据库，成为未知致病病原菌(细菌或真菌)尾。于2012年5月取于乌江偏岩河养殖场网箱，体鉴