鼠尾草酚抗乳腺癌细胞增殖活性及其雌激素受体亚型介导和调节机制的研究.pdf

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1、第39卷第17期2014年9月誊中China圈doum。I中ofCh。n药ese畚edicaV0S1e．p3t9em．Ibsesure，201174鼠尾草酚抗乳腺癌细胞增殖活性及其雌激素受体亚型介导和调节机制的研究赵丕文，DavidYue—WeiLEE，ZhongzeMa，孙艳玲，陶仕英，臧金凤，牛建昭(1．北京中医药大学基础医学院，北京100029；2．McleanHospital，HarvardMedicalSchool，BelmontMA02478)[摘要]既往研究已经表明，鼠尾草酚(ca

2、rnoso1)具有一定的抗乳腺癌效应，但其ER亚型特异性调节和介导机制与该物质抑制细胞增殖效应的相关性尚不清楚。该研究利用雌激素受体(ER)阳性乳腺癌T47D细胞观察鼠尾草酚对细胞增殖活性的影响及其雌激素受体，卢亚型特异性介导和调节机制。以ERa和ER卢特异性拮抗剂MPP，PHTPP为工具药，采用MTr细胞增殖实验观察鼠尾草酚对T47D细胞增殖的影响；检测T47D细胞增殖周期的变化。利用Westernblot方法检测鼠尾草酚对T47D细胞ER和ER表达情况的影响。研究发现，1×10～～l×10-

3、。mol·L鼠尾草酚能够显著抑制T47D细胞增殖，该抑制作用可被ERa拮抗剂MPP增强、被ERIB拮抗剂PHTPP减弱；1×10～，1×10～mol·L鼠尾草酚可使T47D细胞增殖指数显著下降。Westernblot检测结果显示1×10一，1×10～mol·L鼠尾草酚可使T47D细胞ERa和EP~蛋白表达显著增加，并可明显提高ERafEPq3。结果表明鼠尾草酚具有抑制ER阳性乳腺癌细胞增殖的作用，其效应是通过靶细胞雌激素受体，特别是ER途径实现的；同时，鼠尾草酚对靶细胞雌激素受体ERa和ER亚型

4、的表达及其比例具有调节功能。[关键词]鼠尾草酚；乳腺癌；T47D细胞；细胞增殖；细胞周期；雌激素受体迷迭香RosmarinusofficinalisL系唇形科迷迭香细胞生长具有明显抑制效应的丹参酮Ⅱ就是通过属植物，长期以来在抗氧化、抗炎、抗癌作用等方面ER途径发挥作用的。本研究拟以ERa和ER双均有较为深入的研究和广泛的应用¨。近年来的阳性乳腺癌T47D细胞为实验材料，对鼠尾草酚抑研究发现，迷迭香提取物及迷迭香酸、鼠尾草酸、鼠制乳腺癌细胞生长的效应与其ER亚型特异性介导尾草酚(图1)等成分具有抗

5、肿瘤如肺癌J、前列腺和调节功能及其相关性进行分析，进一步深入揭示癌J、结肠癌]、卵巢癌J、乳腺癌L6j，防止致癌物鼠尾草酚抗乳腺癌作用的靶点和机制。质在体内的代谢活化J、抗血管生成等作用J，引起了人们广泛的关注。另有报道也发现迷迭香主要抗氧化成分鼠尾草酚对扩散性大鼠乳腺癌F3II细胞和人乳腺癌MCF-7细胞均具有增殖抑制活性，且具有良好的选择性，是值得开发的乳腺癌抑制剂¨。而乳腺癌细胞中ER亚型的数量及其比例是影响ER阳性细胞增殖活性的重要因素，本实验图1鼠尾草酚的化学结构室在既往研究中也已经发

6、现¨：对ER阳性乳腺癌Fig．tChemicalstructureofcarnosol[收稿日期]2013-l2-301材料[基金项目]同家自然科学基金项目(81273887)；高等学校创新引1．1试剂DMEM(高糖)、无酚红DMEM(高糖)、智计划(}307007)；北京中医药大学自主科研课题(JYBZZ—JS014)胎牛血清、活性炭一葡聚糖苷处理的胎牛血清(CDT．[通信作者]牛建昭，教授，博士生导师，研究方向：中西医结合防治重大疾病的基础研究，Tel：(010)64286813，E-mai

7、l：niujianzhao@FBS)为Hyclone公司产品；雌二醇(estradiol，E2)，126．comMTI"，DMSO，RNase，碘化丙啶(propidiumiodide，·3344·第39卷第l7期中圈中杂志VoS1．39，Issue172014年9月eptember，2014PI)，氯仿，甲醇为Sigma公司产品；ERa，ER抗体在570nm下测定各孔吸光度(A)，计算平均A和增为SantaCruz公司产品；ERa，ER特异性拮抗剂殖率(proliferationrate，PR

8、)。MPP，PHTPP为Tocris公司产品；甘氨酸、Tween-20PR=A实验组／A溶剂对照封i×100％为Amresco公司产品；BCA蛋白定量试剂盒，RIPA2．3细胞周期测定取经无酚红DMEM(含5％裂解液，苯甲基磺酰氟(PMSF)，30％丙烯酰胺，浓缩CDT．FBS)培养4d的T47D细胞，以5×10个／瓶的胶缓冲液，分离胶缓冲液，蛋白相对分子质量Mark-密度接种于25cm的培养瓶中，以无血清DMEM接er，三羟甲基氨基甲烷，十二烷基磺酸钠，脱脂奶粉，种24h待细胞贴壁后，换为含1