酵母菌用美蓝染色_实验二 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别.doc

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1、实验二酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别一、目的要求1.进一步学习并掌握光学显微镜低倍镜和高倍镜的使用方法；2.观察并掌握酵母菌的细胞形态及其子囊、子囊砲子和假菌丝的形态；3.学习并掌握鉴别酵母菌细胞死活的方法；4.了解酵母菌子囊砲子的染色方法及假菌丝观察的压片培养法。二、实验材料1.菌种：酿酒酵母（Saccharomycesctnmisiae）、热带假丝酵母（Candidahopicalis）、卿I裂殖酵母（Suchizosaccharvmycespombe）2.染色液：0」％美蓝染色液、孔雀绿染色液、沙黄染色液、95%乙醇等3.其他：

2、显微镜、载玻片、盖玻片、擦镜纸、吸水纸等三、基本原理酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见的细菌大几倍茯至几十倍，因此，不必染色即可用显微镜观察其形态。大多数酵母以出芽方式进行尢性繁殖，有的二分裂殖；子囊菌纲中的酵母菌在一定条件下，可产生子囊砲子进行有性生殖。酵母菌假菌丝的生成与培养基的种类、培养条件等因素有关。美蓝是一种弱氧化剂，氧化态呈蓝色，还原态呈无色。用美蓝対酵母细胞进行染色时,活细胞山于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能将美蓝山篮色的氧化态转变为无色的还原态型，从而细胞旱无色；I何死细胞或代谢作用微弱

3、的衰老细胞则山于细胞内还原力较弱而不具备这种能力，从血细胞呈蓝色，据此可对酵母菌的细胞死活进行鉴别。四、操作步骤lo水浸片观察：1）制片：在干净的载玻片中央加一滴预先稀释至适宜浓度的酵付液体培养物，从侧面盖上一片盖玻片（先将盖玻片一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上），应避免产生气泡，并用吸水纸吸去多余的水分（菌液不宜过多或过少，否则，在盖盖玻片时，菌液会溢出或出现气泡而影响观察；盖玻片不宜平着放下，以免产生气泡）。2）镜检：将制作好的水浸片置于显微镜的载物台上，先用低倍镜，后用高倍镜进行观察，注意观察各种酵母的细胞形态和

4、繁殖方式，并进行记录。2。美蓝染色1）染色：在干净的载玻片中央加一小滴0.1%美蓝染色液，然后再加一小滴预先稀释至适宜浓度的酿酒酵母液体培养物，混匀后从侧面盖上盖玻片，并吸去多余的水分和染色液（注意染色液和菌液不宜过多或过少，并应基本等量，而口要混匀）。2）镜检：将制好的染色片置于显微镜的载物台上，放置约3min后进行镜检，先用低倍镜,后用高倍镜进行观察，根据细胞颜色区分死细胞（蓝色）和活细胞（无色），并进行记录。3）比较：染色约30min后再次进行观察，注意死细胞数量是否增加。3.子囊抱子的染色与观察1）活化酵母：将酿酒酵母移种至新鲜

5、的麦芽汁琼脂斜而上，培养24h,然后再转种2〜3次2）生泡培养：将经活化的菌种转移到醋酸钠培养基上，28°C培养7-1Odo3）制片：在洁净载玻片的中央滴一小滴蒸谓水，用接种环于无菌条件下挑取少许菌苔至水滴上，涂如均匀，自然风干后在酒精灯火焰上热固定（水和菌均不要太多，涂布时应尽量涂开,否则将造成干燥时间长；热固定温度不宜太高,以免使菌体变形）。4）染色：滴加数滴孔雀绿染色液，lmin后水洗；加95%乙醉脱色30s,水洗；最后用0.5%沙黄染色液复染30s,水洗，最后用吸水纸吸干.5）镜检：将染色片匱于显微镜的载物台上，先用低倍镜，后用

6、高倍镜进行观察，子囊他子呈绿色，菌体和子囊呈粉红色。注意观察子囊泡子的数目、形状，并进行记录。4o假菌丝的观察压片培养法：収新鲜的酵•母菌在薄层马铃蒋浸出汁琼脂培养基平板上划线接种2〜3条,取无菌盖玻片盖在接种线上，于25~28°C培养4~5天后，打开皿盖，置于显微镜下直接观察划线的两侧所形成的假菌丝的形状。五、实验内容1.对所给的酵母菌制片进行形态观察；2.对死活酵母细胞进行美蓝染色鉴别六、实验报告1.绘制各种酵母菌的细胞形态图，注明菌名与放大倍数；2.图示美蓝染色结果；3.用美蓝染色法对酵母细胞进行死活鉴别时■为什么要控制染液的浓度

7、和染色时间？