酵母菌形态观察及死活鉴别.doc

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1、酵母菌形态观察及死活鉴别生命科学学院生科3班郑小煜201100140069同组者：刘梦迪、赵莉、高瑞2022年U月21日星期三一、实验冃的1＞观察酵母菌的形态特征及岀芽生殖方式。2、学会酵母菌的死活细胞鉴别。3、学习并掌握酵母菌子囊鞄子的观察方法。4、巩固显微镜操作技术及无菌操作技术。二、实验原理K形态观察：酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，通常比常见细胞大儿倍甚至十儿倍。大多数酵母菌以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊抱子。2、由于酵母菌细胞个体大，采取涂片的方法制片有可能

2、损伤细胞，一般通过美蓝染液水浸片法來观察酵母菌形态及出芽生殖方式，同时还可以对酵母菌的死活细胞进行鉴定。3、死活鉴定：美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型呈无色。用美蓝对酵母菌的活细胞进行染色时，由丁细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此,具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则成蓝色或淡蓝色，以此进行鉴别。4、子囊砲子的形态观察：用孔雀绿和番红对子囊砲子培养体进行染色可的小细胞即为子囊砲子。用孔雀绿和番红染色后

3、，砲子为绿色，菌体为红色。子囊砲子的形成与否及其数量和形状，是鉴别酵母菌的依据Z-o5、根据酵母菌产生他子（子囊他子和担他子）的能力，可将酵母菌分成三类:形成他子的株系属于子囊菌和担子菌。不形成他子但主耍通过芽殖来繁殖的称为不完全真菌，或者叫“假酵母”。酵母菌在口然界分布广泛，主耍生长在偏酸性的潮湿的含糖环境中，酵母菌是人类文明史中应用的最早的微生物。6、子囊抱子是子囊菌真菌有性生殖产生的有性抱子。在酵母菌中，能否形成子囊他子及其形态是酵母菌分类鉴定的重耍依酵母菌形成子囊抱子需要一定的条件，所以对不同种

4、属的酵母耍选择适合形成子囊他子的培养基。麦氏培养基（葡萄糖一醋酸钠培养基）有利于酿酒酵母子囊他子的形成。三、实验器材1、菌种：酿酒酵母液体培养物，酿酒酵母麦氏斜而培养物。2、培养基：麦氏琼脂培养基，酵母菌合成培养基。3、溶液和试剂：吕氏碱性美蓝染液，孔雀绿染液，番红染液，95%乙醇。4、仪器和其他用品：酒精灯，载玻片，盖玻片，显微镜，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦镜纸，接种环，银子，载玻片夹子，滴管，蒸帼水等。四、实验步骤（一）酵母菌培养基制备1、培养基制备先倒入少量蒸憾水于锥形瓶中，按照配方比例准确

5、加入成分，待成分溶解后,扎上口，放入高压蒸汽灭菌锅内在110°C温度下灭菌30minc2、接种无菌操作将酵•母菌接种到灭过菌的液体培养基内。（-）出芽方式观察及死活细胞鉴别1、取洁净的载玻片一块，用滴管取酵母菌悬滴于载玻片中央。2、滴加一滴吕氏碱性美蓝染液于载玻片屮央，并覆盖液体菌种。3、用银子取一块盖玻片，将盖玻片一边与菌液接触，缓慢将盖玻片倾斜并覆盖在菌液上。4、镜检：即吋用显微镜观察酵母菌的形态及岀芽情况，并根抑颜色区分死活细胞。5min后再次观察，注意死活细胞比例。30分钟后再次观察，并注意死活

6、细胞比例。分析比较三次观察结果。（-）子囊他子的形态观察一麦氏斜面K涂片取一块载玻片，滴一滴蒸憎水于区域中央，用接种环无菌操作由酵母菌麦氏营养斜面挑取适量菌苔，将粘有菌苔的接种环置丁载玻片上的蒸憾水中涂抹，使菌悬液在载玻片上形成均匀薄膜。2、干燥固定涂菌面朝上，通过火焰2-3次固定并干燥。3、加热染色向载玻片滴加数滴5%孔雀绿溶液覆盖涂菌部位，用夹子夹住载玻片在微火上加热2~2.5分钟。4、水洗用缓流自来水冲洗至流出水无色为止。5、脱色用95%乙醇溶液冲洗30秒。6、水洗用缓流口来水将乙醇溶液冲洗干净。

7、7、复染用番红复染液染色30秒。8、水洗，干燥。9、镜检：在油镜下观察酵母菌子囊砲子的形态。五、实验结果吕氏碱性美蓝浓度0.1%0.1%0.1%作用时间即时5分钟30分钟每视野活细胞数（个）儿乎全部很多很多每视野死细胞数（个）儿乎没有较少较少死活细胞实验结果记录酵母菌酵母菌子囊他子六、实验结果分析1、死活鉴别：用美蓝染液染酵母菌后，开始视野中儿乎所有的酵母菌细胞无色，只有少数儿个细胞呈蓝色。5分钟后，视野中蓝色细胞增多。30分钟后，视野中大部分酵母菌呈蓝色，少数还是无色。有一部分细胞处丁出芽生殖期。2、

8、子囊他子：酵母菌的子囊为圆形大细胞，内有圆形的小细胞即为子囊施子。每个菌体中子囊他子数冃不同，每个菌体中可以观察到2・4个子囊抱子，视野中子囊砲子为绿色，菌体为红色。七、实验注意事项1、酵母菌液体培养基放置久了会有沉淀，取菌液前要轻轻摇匀培养基。2、盖玻片要缓慢倾斜覆盖，以免产生气泡。3、用接种环将菌体与染液混合吋不要剧烈涂抹，以免破坏细胞。4、滴加染液要适中，否则用盖玻片覆盖时，染液过多会溢出，过少会产生大量气泡。八、实验思考题K根据你的