基于bafgm细胞株法检测生长激素生物活性研究

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1、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗｃｈｉｎａｇｐｎｅｔＥｍａｉｌ：ｚｇｑｋｙｘ＠ｃｈｉｎａｇｐｎｅｔｃｎ·３５６７··论著·基于ＢＡＦ／ＧＭ细胞株法检测生长激素生物活性研究罗燕飞，热衣兰木·包尔汉，米热古丽·买买提，李静，史兆龙【摘要】目的探讨基于ＢＡＦ／ＧＭ细胞株法检测生长激素（ＧＨ）生物活性的可行性，为临床检测ＧＨ生物活性提供参考方法。方法选取２０１１年７月—２０１３年１２月新疆医科大学第一附属医院儿科收治的特发性身材矮小（ＩＳＳ）患儿４２例（ＩＳＳ组），另选取同期本院预防保健科体检健康儿童５２例

2、（对照组）。建立ＢＡＦ／ＧＭ细胞株，常规培养于ＤＭＥＭ高糖培养基。培养液洗涤后转移到含１０％马血清的培养基中培养１６ｈ。采用含１０％马血清的培养基重悬５细胞，调整细胞浓度为３×１０个／ｍｌ，混匀后取１００μｌ滴在９６孔板中。稀释标准ＧＨ溶液至终浓度为００１～１０００００μｇ／Ｌ，取１０μｌ标准ＧＨ溶液滴加到９６孔板中，培养２２ｈ。每孔加入２２μｌ反应液，继续培养３ｈ，在４９０ｎｍ处测定吸光度（ＯＤ）值。绘制ＯＤ值与ＧＨ生物活性当量关系的标准曲线。采用含１０％马血清的培养基配制促甲状腺激素（１０

3、０ｍＵ／Ｌ）、黄体生成素（１００００Ｕ／Ｌ）、卵泡刺激素（１００００Ｕ／Ｌ）、催乳素（１００Ｕ／Ｌ）、成纤维细胞生长因子（１０００μｇ／Ｌ）、表皮生长因子（１００μｇ／Ｌ）、人类胰岛素样生长因子１（ＩＧＦ１，１０μｇ／Ｌ）、氢化可的松（１００μｇ／Ｌ）、诺和灵Ｒ（１０Ｕ／Ｌ）、Ｌ－甲状腺素钠（６４３５ｎｍｏｌ／Ｌ），同时每孔加标准ＧＨ溶液５μｌ（２０μｇ／Ｌ）进行干扰实验。采集两组受试者空腹静脉血，采用放射免疫分析法（ＩＲＭＡ）测定血清ＧＨ水平；灭活血清标本，以ＭＴＳ法测定４９０ｎｍ处ＯＤ值

4、，代入标准曲线计算血清ＧＨ生物学活性当量。结果ＧＨ生物活性当量与ＯＤ值关系的标准曲线为Ｙ＝０８５２２０ｌｎ（Ｘ）＋０４９８８，Ｒ＝０９６９８，其中Ｘ为ＧＨ生物活性当量，Ｙ为ＯＤ值。加入促甲状腺激素、黄体生成素、卵泡刺激素、催乳素、成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、ＩＧＦ１、氢化可的松、诺和灵Ｒ和Ｌ－甲状腺素钠后测得ＯＤ值分别与标准ＧＨ溶液比较，差异均无统计学意义（Ｐ＞００５）。两组受试者ＧＨ水平比较，差异无统计学意义（Ｐ＞００５）。ＩＳＳ组ＧＨ生物活性当量、ＧＨ生物活性低于对照组，差异

5、均有统计学意义（Ｐ＜００５）。结论基于ＢＡＦ／ＧＭ细胞株法是潜在的检测ＧＨ生物活性的良好方法，且具有一定的抗干扰能力。【关键词】生长激素；生物活性；ＢＡＦ／ＧＭ细胞株；特发性身材矮小【中图分类号】Ｒ３４７５１１【文献标识码】ＡＤＯＩ：１０３９６９／ｊｉｓｓｎ１００７－９５７２２０１６２９０１２罗燕飞，热衣兰木·包尔汉，米热古丽·买买提，等．基于ＢＡＦ／ＧＭ细胞株法检测生长激素生物活性研究．［Ｊ］．中国全科医学，２０１６，１９（２９）：３５６７－３５７０．［ｗｗｗｃｈｉｎａｇｐｎ

6、ｅｔ］ＬＵＯＹＦ，ＲＥＹＩＬＡＮＭＵ·Ｂａｏｅｒｈａｎ，ＭＩＲＥＧＵＬＩ·Ｍａｉｍａｉｔｉ，ｅｔａｌ．ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｇｒｏｗｔｈｈｏｒｍｏｎｅｂａｓｅｄｏｎＢＡＦ／ＧＭｃｅｌｌｌｉｎｅ［Ｊ］．ＣｈｉｎｅｓｅＧｅｎｅｒａｌＰｒａｃｔｉｃｅ，２０１６，１９（２９）：３５６７－３５７０．ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＡｃｔｉｖｉｔｙｏｆＧｒｏｗｔｈＨｏｒｍｏｎｅＢａｓｅｄｏｎＢＡＦ／ＧＭＣｅｌｌＬｉｎｅＬＵＯＹａｎ－ｆｅｉ，ＲＥＹＩＬＡＮＭＵ·Ｂａｏｅｒｈａｎ，ＭＩＲＥＧＵＬＩ·Ｍａｉｍ

7、ａｉｔｉ，ＬＩＪｉｎｇ，ＳＨＩＺｈａｏ－ｌｏｎｇＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｅｄｉａｔｒｉｃｓ，ｔｈｅＦｉｒｓｔＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＸｉｎｊｉａｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｕｒｕｍｑｉ８３００５４，ＣｈｉｎａＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＭＩＲＥＧＵＬＩ·Ｍａｉｍａｉｔｉ，ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｅｄｉａｔｒｉｃｓ，ｔｈｅＦｉｒｓｔＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＸｉｎｊｉａｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｕｒｕｍｑｉ８３００５４，Ｃｈｉ

8、ｎａ；Ｅｍａｉｌ：ｍｉｌｉｋｉｔａ１７＠ａｌｉｙｕｎｃｏｍ【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙｏｆｕｓｉｎｇＢＡＦ／ＧＭｃｅｌｌｌｉｎｅｍｅｔｈｏｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＧＨ，ａｎｄｔｏｐｒｏｖｉｄｅｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒｃｌｉｎｉｃａｌｄｅｔｅｃｔｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＧＨ．Ｍｅｔｈｏｄｓ４２ｃｈｉｌｄｒｅｎｗｉｔｈＩＳＳｗｈｏｒｅｃｅｉｖｅｄ