戊型肝炎病毒诊断基因芯片制备的初步研究

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1、广东药学院学报JournalofGuangdongPharmaceuticalCollegeJun．2010。26(3)戊型肝炎病毒诊断基因芯片制备的初步研究王治伟，马文丽，夏薇，杨琼，郑文岭(1．南方医科大学基因工程研究所，广东广州510515；2．广州医学院港湾医院检验科，广东广州510700；3．华南基因组中心，广东广州510830)摘要：目的制备戊型肝炎病毒诊断基因芯片并进行杂交验证。方法利用Oligo6．0软件针对戊型肝炎病毒诊断基因保守区域设计多对寡核苷酸探针，用芯片点样仪将其按照阵列设计打印在玻片上制备成基因芯片。样品标记采用限制性显示技术，样品标记后进行杂交，进而在芯片扫描仪

2、中对得到的探针数据进行分析并实验验证。结果芯片杂交后得到的探针荧光强度好，信噪比高，符合临床样品的基因亚型，RT—PCR验证后得到的电泳结果与芯片实验一致。结论实验设计并制备的寡核苷酸戊型肝炎病毒诊断芯片能用于戊肝的检测，为这项疾病的实验室诊断提供了一种快速平行的检测方法。关键词：戊型肝炎；基因芯片；诊断中图分类号：R512．6；Q812文献标识码：Adoi：10．3969／j．issn．1006—8783．2010．03．025文章编号：1006—8783(2010)03—0314—05PreliminarystudyonpreparationofdiagnosticDNAmicroarr

3、ayforhepatitisEvirusWANGZhiwei，，MAWen．1i，XIAWei，YANGQiong，ZHENGWen．1ing(1．InstituteofGeneticEngineering，SouthernMedicalUniversity，Guangzhou，Guangdong510515，China；2．ClinicalLaboratory，GangwanHospitalofGuangzhouMedicalCollege，Guaagzhou，Guangdong510700，China；3．C．enomeCenterofSouthChina，Guangzhou，Guang

4、dong510830，China)Abstract：ObjectiveTostudythepreparationofdiagnosticDNAmicroarrayforhepatitisEvirus(HEV)．MethodsThespecificprimersofoligoprobesweredesignedwiththeOligo6．0programaccordingtotheconservedregionofHEV．TheDNAmicroarrayswerepreparedbyspottingtheprobestothesurfaceofglassslidesbytherobotics．

5、RestrictiondisplayPCRwasusedtolabelthesamples．ResultsTheresultsshowedthattheoligoprobeswerespecifichybridizedwithHEVsamples．Andfromthehybridizingsignalsonmicroarray，thespecificityandsensitivityintheHEVdiagnosisweresatisfactoryandtheresultswerealsodetectedbyRT-PCR．ConclusionUsingtheprobestoprepareth

6、eDNAmicroarrayforclinicaldiagnosisofHEVisaquickandefectivemethod．Keywords：HEV；microarray；diagnosis戊型肝炎(hepatitisE，HE)是由HE病毒性肝炎，给社会带来了很大的危害。目前HE的(hepatitisEvirus，HEV)引起的一种经粪口途径传检测方法主要有免疫电镜技术(IEM)、聚合酶链反播的急性传染病。HE呈全球分布，是世界各地尤应(PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和原位杂交。其发展中国家主要的健康问题之一，成为继甲型肝但HEV感染窗口期，患者自身免疫系统以及检测方炎外另一

7、种经肠道传播的严重危害人类健康的病毒法等多方面原因给HE的诊断带来了难度，因而有必要寻找一种高效、高通量、快速的HEV检测方收稿日期：2010—06—02法_3j。基因芯片技术按照碱基互补配对原则，探针基金项目：广东省重点实验室建设经费资助(2004B60144)特异性地结合相应被荧光标记的分子，并通过对杂作者简介：王治伟(1971一)，硕士，副主任技师，主要从事免疫学研究；通讯作者：马文丽，教授，博士生导师