毕赤酵母工程菌发酵条件的优化

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1、食品工业科技研究与探讨ScienceandTechnologyofFoodIndustry毕赤酵母工程菌发酵条件的优化窦烨,王清路,李俏俏(山东淄博万杰医学院生物化学教研室,山东淄博255213)摘要:从碳源、生物素、接种比率、甲醇浓度、pH、诱导时间等方面对重组酵母摇瓶发酵条件进行了研究,初步确认了摇瓶水平发酵各因素的最优条件,发现控制适宜的甲醇浓度十分重要。同时,利用30L发酵罐对长时间甲醇诱导发酵做了研究,发现随着发酵时间的增加,分泌蛋白产量先增加然后下降,菌体生长速度放慢,但菌体湿重一直在增加。关键词:发酵优化,毕赤酵母,摇瓶发酵,甲醇诱导Optimizationofthefermen

2、tationconditionsofPichiaPastorisDOUYe,WANGQing-lu,LIQiao-qiao(BiochemistryOffice,WanjieMedicalCollege,Zibo255213,China)Abstract:Yeastfermentationconditionswerestudiedwiththecarbonsource,biotin,immunizationrates,methanolconcentration,pHandinductiontime1Variousfactorsoptimalconditionswasconfirmedbyfla

3、sk-fermentationandfoundthatcontrollingtheconcentrationofmethanolwasveryimportant1Atthesametime,thestudywasdoneforalongtimemethanol-inducedfermentationwith30Lfermentedandfoundthatyieldofproteinfirstincreaseandthendecrease,cellgrowthsloweddown,butbacterialwet-weighthasbeenincreasing1Keywords:fermentat

4、ionoptimization;PichiaPastoris;flask-fermentation;methanolinduction中图分类号:TS20113文献标识码:A文章编号:1002-0306(2008)06-0168-04巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)表达系统是目分泌表达量。[1]前最优秀、应用最广泛的外源基因表达系统之一。1材料与方法它不但克服了大肠杆菌表达系统不能表达结构复杂111材料与仪器的蛋白质、表达的蛋白多形成包涵体、背景蛋白多、重组毕赤酵母GS115/pPIC9KM/pPIC315KV本表达量不很高等缺陷;弥补了哺乳类细胞、昆虫细胞校构建保存;YPD培养

5、基1%酵母提取物,2%胰蛋表达系统操作复杂,表达水平低,生产造价昂贵的不白胨,2%葡萄糖;BMGY培养基1%酵母提取物,足,还具有其它酵母表达系统无法比拟的优越之2%胰蛋白胨,pH610100mmol/L磷酸缓冲液,1134%[2]处。但是酵母为高好氧微生物,在发酵过程中常常YNB,0100004%Biotin,1%甘油;BMMY培养基除会出现供氧不足而限制了细胞密度的情况。透明颤以015%甲醇代替甘油外,其余成分均与BMGY相菌血红蛋白(Vitreoscillahemoglobin,VHb)是一种类同;摇瓶发酵基础生长培养基1%酵母提取物,2%似于人血红蛋白的胞内可溶物质,它能够从分子水胰蛋

6、白胨,pH610100mmol/L磷酸缓冲液,1134%平上提高工程菌对氧气的利用能力。基于此种特YNB,0100004%Biotin;摇瓶发酵基础诱导培养基性,VHb已经在α-淀粉酶、青霉素酰化酶及PHB等1134%YNB,0100004%Biotin,pH610100mmol/L磷酸[3,4]多种产品发酵中成功应用。Monellin甜蛋白是存缓冲液;发酵罐高密度发酵培养基10×BasalSalts在于西非热带植物Dioscoreophyllumcumminsii浆果中2167%磷酸,01093%硫酸钙,1182%硫酸钾,1149%硫的一种天然甜味蛋白,其甜度为等质量蔗糖的300酸镁,014

7、13%氢氧化钾;发酵罐高密度发酵培养基倍。Monellin的吸收和利用不依赖于胰岛素,不存在250×PTM1016%硫酸铜,01008%碘化钠,013%硫类似糖精食用安全性问题,而且由于甜度高、低热量酸锰,0102%钼酸钠,01002%硼酸,0105%氯化钴,2%[5]的特点,Monellin的需求不断增长。早在20世纪氯化锌,615%硫酸亚铁,01025%生物素,015%硫酸。[6]80年代就开