豇豆重花叶病毒RT-LAMP检测方法的建立-论文.pdf

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1、艋扬铱力2012。38(1)：123—127PlantProtection豇豆重花叶病毒RT-LAMP检测方法的建立郭木金，廖富荣，陈青，林石明，陈红运，沈建国。(1．厦门出入境检验检疫局，厦门361026；2．福建农林大学生物农药与化学生物学教育部重点实验室，福州350002；3．福建出入境检验检疫局，福州350003)摘要豇豆重花叶病毒(Cowpeaseveremosaicvirus，CPSMV)是我国进境植物检疫性有害生物，本研究根据CPSMV的外壳蛋白基因序列设计引物，以期建立CPSMV的反转录一环介导等温扩增

2、(reversetranscription1oop-mediatedisotherma1amplification，RT-LAMP)检测方法。条件优化后，建立了CPSMV的RTLAMP方法，该方法可将CPsMV与同属其他病毒准确区分，具有良好的特异性。灵敏度试验显示，RT-LAMP比普通RTPCR灵敏度高1O倍。说明本研究建立的RIAMP方法适用于CPSMV的快速、特异和灵敏的检测。关键词豇豆重花叶病毒；反转录一环介导等温扩增；检测中图分类号：S436．43文献标识码：ADOI．10．3969／j．[ssn．0529—

3、1542．2012．O1．027DetectionofCowpeaseveremosaicvirusbyreversetranscriptionloop．mediatedisothermalamplificationGuoMujin，LiaoFurong，ChenOing，LinShiming，ChenHongyun，ShenJianguC(1．XiamenEntry-ExitInspectionandQuarantineBureau，Xiamen361026，China；2．KeyLaboratoryofBiopes

4、ticidesandChemicalBiology，FujianAgriculturalandForestryUniversity，MinistryofEducation，Fuzhou350002，China；3．FujianEntry-ExitInspectionandQuarantineBureau，Fuzhou350003，China)AbstractCowpeaseveremosaicvirus(CPSMV)isaquarantinepathogeninChina．Thisstudyisaimedtoestab

5、lishareversetranscriptionloop—mediatedisothermalamplification(RT—LAMP)methodfordetectionofCPSMV．Theresultsshowedthat，underoptimalreactionconditions，theRT—LAMPmethodcoulddistinguishCPSMVfromoth—ercomoviruses．Asensitivitytestshowedthatthismethodwas10timesmoresensi

6、tivethanthestandardRT-PCRassay．ThemethodinthisstudyiSsuitableforfast，specificandsensitivedetectionofCPSMV．KeywordsCowpeaseveremosaicvirus；reversetranscriptionloop—mediatedisothermalamplification；detec—tion豇豆重花叶病毒(Cowpeaseveremosaicvirus，巴西、墨西哥等国家l_2j，而在我国还没有发生危害

7、的CPSMV)为类小RNA病毒目(Picornavirales)、伴报道。CPSMV可通过菜豆叶甲(Ceratomatrifur—生豇豆病毒科(Secoviridae)、豇豆花叶病毒亚科cata)、南美叶甲(Diabroticaspeciosa)等昆虫介体传(Comovirinae)、豇豆花叶病毒属(Comovirus)成员。播，也可机械传播，还可通过长豇豆(Vignasesqui—该病毒主要侵染大豆(Glycinemax)、菜豆(Phaseopedalis)、豇豆(．unguiculata)等种子传播，以及花lusv

8、ulgaris)、绿豆(Vignaradiata)、豇豆(Vigna粉传播l_3]。由于该病毒的自然寄主在中国广泛种unguiculata)等豆科植物，造成叶片斑驳和花叶，严植，且气候条件相似，极可能随着进境的种子和昆虫重时可导致整株萎缩甚至死亡[卜。目前，CPSMV在国内广泛传播，对我国豆科植物生长造成严重主要分布在美洲地区，如