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时间:2017-12-08
《一种豇豆重花叶病毒ic-rt real-time pcr检测方法的建立》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、浙江大学学报(农业与生命科学版)36(5):491~496,2010JournalofZhejiangUniversity(Agric.&LifeSci.)文章编号:10089209(2010)05—0491—06DOI:10.3785/j.issn.1008—9209.201005.003一种豇豆重花叶病毒IC—RTreal—timePCR检测方法的建立李彬,粟寒,吴翠萍,周明华,安榆林(江苏出入境检验检疫局,江苏南京210001)摘要:为建立豇豆重花叶病毒(Cowpeaseveremosaicvirus,CPSMV)免疫捕获一反转录实时荧光(Ic—RTreal—ti
2、me)PCR分子检测方法,利用从ATCC和DSMZ引进的CPSMV标准毒株,先建立CPSMVRTreal—timePCR检测方法;在此基础上,建立用于CPSMV检测的IC—RTreal—timePCR方法结果表明:IC—RTreal—timePeR方法的灵敏度可达500Pg叶组织;该方法具有特异性好、灵敏度高、操作简便等优点,省去了RNA的提取过程,适用于豇豆等豆类种子及种苗中对豇豆重花叶病毒的快速检测.关键词:豇豆重花叶病毒免疫捕获反转录;实时荧光PCR中图分类号:S4l一31;S643.4Q93—332文献标志码:ALIBin,SUHan,WUCui—ping,ZH
3、OUMing—hua,ANYu—lin(JiangsuEntry~ExitInspectionandQuarantineBureau,Nanjing210001,China)DevelopmentofIC—RTreal—timePeRmethodfordetectionofCowpeaseveremosaicvirus.JournalofZhejiangUniversity(Agric.&LifeSci.),2010,36(5):491-496Abstract:Amethodofimmuno—capturereversetranscriptreal—time(IC—RT
4、real—time)PCRassaywasdevelopedfordetectionofCowpeaseveremosaicvirus(CPSMV).ByintroducingstandardCPSMVstrainsfromATCCandDSMZasmaterials,RTreal—timePCRmethodwasconstitutedfirstly,whichshowedgoodamplificationreactionandspecificity.BasedontheRTreal—timePCR,ICRTreal—timePeRdetectionmethodforC
5、PSMVwassetup.Thesensitivityoftheassaycouldreach500Pgleaftissues.Meanwhile,theIC—RTreal—timePeRassaywascharacteristicofgoodspecificity,highsensitivity,convenientoperation,andavoidedRNAextraction,whichwassuitableforrapiddetectionofCPSMVfromlegumeseedsandseedlingssuchascowpea.Keywords:Cowpe
6、aseveremosaicvirus;immuno—capturereversetranscript;realtimePCR豇豆重花叶病毒(Cowpeaseveremosaic株枯死;在田间对豇豆的侵染率可达100,产virus,CPSMV)属于豇豆花叶病毒科量损失可达5O%~2-43.(Comoviridae)、豇豆花叶病毒属(Comovirus)目前CPSMV主要分布在美洲地区,如美的确定种¨1J.该病毒的自然寄主为豆科植物,可国、巴西、秘鲁、委内瑞拉、特立尼达、波多黎各、严重侵染豇豆、大豆等多种作物.该病毒侵染豇哥斯达黎加和苏里南等国家[5],中国尚无发生豆后,可
7、造成叶片花叶和斑驳,严重的可导致整与危害报道.CPSMV可通过种子进行远距离收稿日期:2009—12-15基金项目:江苏出入境检验检疫局科研项目(2006KJ35)作者简介:李彬(1972),男,江西景德镇人,高级农艺师,从事植物检疫研究.E—mail:libin@iseiq.govcn浙江大学学报(农业与生命科学版)第36卷传播,其中豇豆的种传率为10,长豇豆(CPSMVR),条件为42℃反应60min.(Wignasesquipedalis)的种传率为8;在田1.2.2免疫捕捉PCR管的制备免疫捕捉问,该病毒还可以通过菜豆叶甲(Cer
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