复方牡蛎根管充填糊剂的皮肤致敏性观察.doc

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1、复方牡蛎根管充填糊剂的皮肤致敏性观察作者：刘梦冬邓姑许晓燕孙慧斌尚伟【摘耍】B的评价一种新型根管充填糊剂——复方牡蛎糊剂潜在的皮肤致敏性。方法采川豚鼠最人剂量试验方法，选用健康H色豚鼠40只，随机分为阴性对照组、粉剂组、混合物组、阳性对照组（各10只），分别丁•皮内注射9g/L氯化钠溶液、材料粉剂浸提液、材料混合物浸提液、50g/L甲醛溶液与完全弗氏佐剂的乳化液，进行初次致敏，1周厉进行二次致敏，于二次致敏厉第14天进行激发接触，分别丁•24、48、72h厉观察注射处皮肤有无红斑、水肿现象，并计算致敏率。结果阴性对照组

2、、粉剂组与混合物组动物均无明显致敏反应，阳性对照纽出现明显红斑、水肿现彖。粉剂组致敏率10%,混合物组的致敏率为0。结论复方牡蛎糊剂作为根管充填糊剂无潜在的皮肤致敏性。【关键词】根管充填材料；皮肤致敏试验；壳聚糖；豚鼠根管治疗术的临床疗效与根管充填糊剂的性能有密切的关系。日前，国内临床上常用的根管充填糊剂各有优缺点，传统的根管充填材料（氧化锌丁香汕糊剂、根管充填糊剂）虽然价格低廉，但有不少弊端。国外产品（如红糊，Vitapex）虽然性能优越，但价格昂贵，难以在国内普及。复方牡蛎糊剂是将传统屮药牡蛎粉与竣甲基壳聚糖混合制

3、成的一种糊剂，具有根管充填糊剂所应有的多种特性，并可能修复根尖周组织。该材料作为根管填充材料应用于临床需耍进行系列的实验研究。本文根据TSO109931标准[1],对该材料的必测项口——皮肤致敏性进行研究，以对其生物相容性进行初步的检测。1材料和方法1.1材料牡蛎壳粉（生物碳酸钙），产自渤海湾，细度200S,由屮国海洋人学提供；竣甲基壳聚糖，由中国海洋大学提供；C02恒温细胞培养箱（NationalAppounce）、完全弗氏佐剂（FCA,S1GMALDRICHCO.）,均产自美国。健康白色豚鼠40只（上海斯莱克实验动

4、物有限公司提供），体质量300〜500g,随机分为4组，分别为粉剂组、混合物组、阴性对照组和阳性对照组，每组10只。1.2方法1.2.1材料制备将牡蛎壳粉作为材料的粉剂，将500mg拔甲基壳聚糖加热溶解f10mL双蒸水屮（50g/L）,作为该材料的液剂。将牡蛎壳粉过200日筛孔后与竣甲基壳聚糖液按1.5：1.0（V/V）的比例混合调成糊状，待其凝I古I作为该材料的混合物。根据我国国家标准GB/T16886.51997的规定，将材料粉剂及调合固化24h的混合物粉碎后，经高温、高压消毒，按0.2kg/L的比例溶于9g/L氯

5、化钠溶液中，配成200g/L的溶液，置37°C细胞培养箱24h,取其上清液即为材料浸提液。取完全弗氏佐剂按照1:1比例分别与材料浸提液及9g/L氯化钠溶液和50g/L甲醛溶液均匀混合，制备成混合乳化液。1.2.2初次致敏根据豚鼠最人剂量试验方法的耍求，对各组动物采用相同处理方式皮下注射试剂：在豚鼠背部剪毛4cmX6cm,消毒后于用胛骨内侧从头向尾成对地注射6个点，每点注射0.1mL,阴性对照组注射完全弗氏佐剂与9g/L氯化钠溶液的乳化液，阳性对照组注射完全列氏佐剂与甲醛的乳化液，粉剂组注射材料粉剂浸提液与完全弗氏佐剂等

6、体积乳化物，混合物组注射混合物浸提液与完全弗氏佐剂的乳化液。0.2.3二次致敏试验第7天同区域剪毛，100g/L十二烷基硫酸钠涂布各注射点，24h厉各注射点涂布相应的被试液。1.2.4激发接触于二次致敏厉第14天，在豚鼠腹部剪毛2cmX4cm,消毒后于皮内注射相应被试液0.1mL,注射后24、48、72h观察注射点情况。1.2.5致敏性评价按照皮狀反应程度评分标准对各注射点的反应程度记分，评分标准如下:无红斑水肿记为0分，轻度红斑水肿记为1分，屮度红斑水肿记为2分，严重红斑水肿记为3分，紫红色斑并有焦痂形成、重度水肿、

7、皮肤隆起记为4分。皮狀致敏试验以致敏率表示致敏的程度，致敏率是反应评分为1分或以上的动物数占该组动物总数的百分比，即致敏率二致敏动物数/动物总数X100%。并按Mafhusson致敏率分级标准分级：致敏率0〜8%为I级，弱致敏物；致敏率9%〜28%为II级，轻度致敏物；致敏率29%〜64%为III级，屮度致敏物；致敏率65%〜80%为IV级，强致敏物；致敏率81%〜100%为V级，极强致敏物。2结果阳性对照组致敏动物数为10只；阴性对照组致敏动物为0只；粉剂组致敏动物数为I只，致敏率为10%,按致敏率分级标准分度为II

8、度，为轻度致敏物；混合物组致敏动物数为0只，无致敏性。3讨论在皮狀致敏反应过程屮，半抗原渗透入皮扶，与皮狀蛋白质结合后具抗原性。皮肤内的郎罕细胞将抗原传递给特异型淋巴细胞，其屮具有长寿命的记忆细胞在激发阶段作为原始活性因子，以厉再接触同一抗原时，致敏的淋巴细胞释放淋巴因子，吸引炎细胞至局部产生反应，导致一系列有害反应。本试验采用皮