复方牡蛎根管充填糊剂的皮肤致敏性观察论文

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1、复方牡蛎根管充填糊剂的皮肤致敏性观察论文刘梦冬邓婧许晓燕孙慧斌尚伟【摘要】目的评价一种新型根管充填糊剂——复方牡蛎糊剂潜在的皮肤致敏性。方法采用豚鼠最大剂量试验方法，选用健康白色豚鼠40只，随机分为阴性对照组、粉剂组、混合物组、阳性对照组（各10只），分别于皮内注射9g/L氯化钠溶液、材料粉剂浸提液、材料混合物浸提液、50g/L甲醛溶液与完全弗氏佐剂的乳化液，进行初次致敏，1周后进行二次致敏，于二次致敏后第14天进行激发接触，分别于24、48、72h后观察注射处皮肤有无红斑、水肿现象.freelg羧甲基壳聚糖加热溶解于10mL双蒸水中(50g/L），作为该材料的液剂。将牡蛎壳粉过200目筛孔后

2、与羧甲基壳聚糖液按1.5∶1.0(V/V)的比例混合调成糊状，待其凝固作为该材料的混合物。根据我国国家标准GB/T16886.51997的规定，将材料粉剂及调合固化24h的混合物粉碎后，经高温、高压消毒，按0.2kg/L的比例溶于9g/L氯化钠溶液中，配成200g/L的溶液，置37℃细胞培养箱24h，取其上清液即为材料浸提液。取完全弗氏佐剂按照1∶1比例分别与材料浸提液及9g/L氯化钠溶液和50g/L甲醛溶液均匀混合，制备成混合乳化液。1.2.2初次致敏根据豚鼠最大剂量试验方法的要求，对各组动物采用相同处理方式皮下注射试剂:在豚鼠背部剪毛4cm×6cm，消毒后于肩胛骨内侧从头向尾成对地注射6

3、个点，每点注射0.1mL,阴性对照组注射完全弗氏佐剂与9g/L氯化钠溶液的乳化液，阳性对照组注射完全弗氏佐剂与甲醛的乳化液，粉剂组注射材料粉剂浸提液与完全弗氏佐剂等体积乳化物，混合物组注射混合物浸提液与完全弗氏佐剂的乳化液。1.2.3二次致敏试验第7天同区域剪毛，100g/L十二烷基硫酸钠涂布各注射点，24h后各注射点涂布相应的被试液。1.2.4激发接触于二次致敏后第14天，在豚鼠腹部剪毛2cm×4cm，消毒后于皮内注射相应被试液0.1mL，注射后24、48、72h观察注射点情况。1.2.5致敏性评价按照皮肤反应程度评分标准对各注射点的反应程度记分，评分标准如下:无红斑水肿记为0分，轻度红斑水

4、肿记为1分，中度红斑水肿记为2分，严重红斑水肿记为3分，紫红色斑并有焦痂形成、重度水肿、皮肤隆起记为4分。皮肤致敏试验以致敏率表示致敏的程度,致敏率是反应评分为1分或以上的动物数占该组动物总数的百分比，即致敏率=致敏动物数/动物总数×100%。并按Mafhusson致敏率分级标准分级：致敏率0～8%为Ⅰ级，弱致敏物；致敏率9%～28%为Ⅱ级，轻度致敏物；致敏率29%～64%为Ⅲ级，中度致敏物；致敏率65%～80%为Ⅳ级，强致敏物；致敏率81%～100%为Ⅴ级，极强致敏物。2结果阳性对照组致敏动物数为10只；阴性对照组致敏动物为0只；粉剂组致敏动物数为1只，致敏率为10%,按致敏率分级标准分度为

5、Ⅱ度，为轻度致敏物；混合物组致敏动物数为0只，无致敏性。3讨论在皮肤致敏反应过程中，半抗原渗透入皮肤，与皮肤蛋白质结合后具抗原性。皮肤内的郎罕细胞将抗原传递给特异型淋巴细胞，其中具有长寿命的记忆细胞在激发阶段作为原始活性因子，以后再接触同一抗原时，致敏的淋巴细胞释放淋巴因子，吸引炎细胞至局部产生反应，导致一系列有害反应。本试验采用皮内注射的方法减少了机体免疫系统对待测材料的影响，可以重新组合致敏物，具有较高的可靠性，是致敏试验的首选方法。豚鼠最大剂量试验是国际上评价化学物引起皮肤致敏作用的经典方法，在我国已列入国家标准。本试验参照ISO1099310标准2，选用白色豚鼠作为实验动物。豚鼠血清

6、中含有丰富的补体，是实验动物中补体含量最多的一种动物，其补体非常稳定。因此，豚鼠皮肤对刺激反应敏感，且其迟发性超敏反应与人类相似。其中2～3月龄、体质量为350～400g的豚鼠最适合用于过敏反应的研究。弗氏佐剂是免疫学上广泛应用的油类佐剂，分为完全弗氏佐剂和不完全弗氏佐剂两种。完全弗氏佐剂是在不完全佐剂的基础上加一定量的分支杆菌制成。它的高度佐剂活性是其他物质难以相比的，可使正常状态下无免疫原性的物质成为免疫原，并能启动细胞免疫。完全弗氏佐剂作为一种增强免疫反应的药物，可以最大限度地放大免疫反应的程度，对于材料致敏性的检测有较高的准确性、灵敏性和可靠性。根管充填材料与活体组织接触后，不可避免地

7、会与体液、组织间液发生作用，对活体产生影响。本试验选用9g/L氯化钠溶液作为浸提递质，使待测材料浸提液的性质尽可能与实际情况相似。本试验复方牡蛎糊剂未显现出皮肤致敏性与该材料的性质有关。羧甲基壳聚糖是壳聚糖分子中引入羧甲基得到的一种水溶性壳聚糖衍生物，它具有良好的生物相容性，并对多种口腔重要厌氧菌有抑制作用3。而且它可直接作用于骨母细胞，促进其分化和骨矿物质的合成，提高碱性磷酸酶的活性，加速骨基质