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时间:2020-04-02
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1、病毒性肝炎标志物的检测江苏省临床检验中心许斌2008-5-12JSCCL-XUBIN发现肝炎病毒的历史背景1900年早期两种肝炎的自然传染性被认可非常易传染低传染性血清肝炎(成为知名的类型B)(成为知名的类型A)1965:澳洲发现(HBsAg)类型B抗原1973:HAV测试被应用renewedinterestinhepatitisincludingposttransfusionform1978:HAV不成为慢性HBVp/t肝炎的描述1975:residualhepatitisafter1977:deltavirusintroductionofHBVAgdescribed1980:fa
2、ecal/oralformscreeningsuggestedofNANBrecognisedotherp/thepatitisviruses1983:VirusdistinctfronHAV,polio-orpicornaviruses1986:delta-viruslinkedtoHBVinfection1988:cloningofHCV1988:namedHEV1990:HGV-cDNAclonedresidualcasespossiblereservoirinanothervirus?macaquesHGVHAVHEVHCVGA/GBHBVHDV2008-5-12JSCCL-
3、XUBIN各型肝炎的特征及标志物甲型乙型丙型丁型戊型庚型输血传播肝炎肝炎肝炎肝炎肝炎肝炎肝炎病毒HAVHBVHCVHDVHEVHGVTTV传播方式粪-口经血经血经血粪-口经血经血或粪口慢性化——2-7%50-70%2-70%——10-20%2-19%癌变危险性无有有有无无无潜伏期15-45天30-120天1-5月20-90天20-180天不清不清标志物血清型抗-HAV二对半抗-HCVHDAgHEAg(IgG,前S1,S2抗-HDV抗-HEVIgM)抗原(体)基因型RNADNARNADNARNARNADNA2008-5-12JSCCL-XUBIN检测方法方法灵敏度(ng/ml)适用免疫
4、扩散500血清,初步定性凝集反应100-10血清,定性,筛选金标试纸10-5血清,定性,筛选放射免疫1-0.1血清,定量ELISA1-0.1血清,定性,常规化学发光0.05-0.01血清,定量基因技术50COPY核酸,定性,定量2008-5-12JSCCL-XUBIN放射免疫ng/ml2008-5-12JSCCL-XUBINELISA•常规方法特点:“”局限性:ngCV15-20%“HD-HOOK”2008-5-12JSCCL-XUBINELISA原理–双抗体(原)夹心法,–间接法–竞争法2008-5-12JSCCL-XUBIN高值钩镰效应(HD-HOOK)在二位点夹心E
5、LISA中,其剂量反应曲线的高剂量(HIGHDOSE,HD)区段,线性走向不是呈平台状无限后延,而是向下弯曲状,似一只钩子或一把镰刀(HOOK),MILES(1974)根据此现象写实性地称之为“HD-HOOK”效应。产生该现象的分子机理有“分子变构说”和“浓度效应”等推论。一步法和二步法均存在,只是前者出现的更早些,大多数是高值低吸光度,很少阴性结果。2008-5-12JSCCL-XUBINELISA原理今后的发展方向•聚苯乙烯表面的高级制备。PVDF•酶促信号放大的改变,2008-5-12JSCCL-XUBIN试剂盒选择•卫生部规定乙肝试剂,丙肝试剂,艾滋病试剂,梅毒试剂及血型试
6、剂必须使用经卫生部生物制品检定所检定合格,并贴有防伪标签的产品,试剂应从灵敏度,特异性,精密度,稳定性,简便性,安全性及经济性作出全面的评价。–灵敏度:12–特异性:–精密度:ELISACV15%2008-5-12JSCCL-XUBINCLSII/LA23-AAssessingthequalityofimmunoassaysystems:radiooimmunoassaysandenzyme,fluorescence,andluminescenceimmunoassays;approvedguideline•11.2:Thelowerimmunochemicaldetectionli
7、mitforanassayrepresentsthelowestlevelofanananlytethatcanbereproduciblydetected.thelaboratoryortestsensitivityisidenticaltothedetectionlimit;usecutoffvalue•Clinical(diagnostic)sensitivity:theproportionofpatientswithawell-definedcli
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