甾醇检验操作规程.pdf

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1、甾醇检测标准操作规程1.试剂：1.1胆固醇1.2标准品菜籽甾醇，SG，96.9%菜油甾醇，Sigma，min65%豆甾醇，Sigma，95%谷甾醇，Sigma，97%1.3乙酸乙酯2.仪器：气相色谱检测器：氢焰离子检测器色谱柱：HP-5或DB-1HT3.色谱条件：色谱柱温度：270℃进样口温度：300℃检测器温度：300℃载气和流速：氮气，35ml/min4.检验步骤：4.1标准品溶液的配制4.1.1内标液A的配制（胆固醇2mg/ml）�精确称取20.0mg的内标物胆固醇于10.0ml的容量瓶内�加入约8ml乙酸乙酯�超声处理至胆固醇完全

2、溶解�用乙酸乙酯定容4.1.2甾醇标准品溶液B的配制（菜籽甾醇，菜油甾醇，豆甾醇，β-谷甾醇）�精确称取各甾醇标品（菜籽甾醇，菜油甾醇，豆甾醇，β-谷甾醇）80.0mg于四个10.0ml的容量瓶中�分别加入约8ml的乙酸乙酯�超声处理至固体颗粒完全溶解�用乙酸乙酯定容4.1.3工作标样溶液C的配制�分别吸取甾醇标准溶液B（菜籽甾醇，菜油甾醇，豆甾醇，β-谷甾醇）各1.0ml混合得到混合甾醇标准溶液D�吸取混合甾醇标准溶液D1.0ml与1.0ml的内标液A混合得到工作标样C4.1.4待测样品溶液1（定量测定）的配制�精确称取待测样品20.0

3、mg于10.0ml容量瓶中�加入约8ml的乙酸乙酯�超声处理至固体物质完全溶解�用乙酸乙酯定容�吸取1.0ml待测样品溶液与1.0ml的内标液A混合4.1.5待测样品溶液2（定性测定）的配制�精确称取待测样品20.0mg于10.0ml容量瓶中�加入约8ml的乙酸乙酯�超声处理至固体物质完全溶解�用乙酸乙酯定容4.2检测步骤�如3中给定的温度等条件对气象色谱的色谱柱、进样器和检测器进行设置�进空白样1μl�进1μl的工作标样C，确定各甾醇单体的保留时间各甾醇组分相对于内标胆固醇的相对保留时间为：菜籽甾醇约为1.06，菜油甾醇约为1.18，豆

4、甾醇约为1.25，β-谷甾醇约为1.38.（色谱柱型号为DB-1HT）�重复进两针工作标样�进待测样溶液1�进待测样溶液2�对获得的气相色谱图进行定量计算4.3数据处理及结果计算用内标法分析计算各甾醇的百分含量4.3.1定量计算Kstandard的值为工作标样C的色谱图中的各甾醇组分（菜籽甾醇、菜油甾醇、豆甾醇、β-谷甾醇）与内标物的峰面积之比，即：AstandardKstandard=AISKsample的值为待测样1的色谱图中的各甾醇组分（菜籽甾醇、菜油甾醇、豆甾醇、β-谷甾醇）与内标物的峰面积之比，即：AsampleKsample=

5、AIS则通过下式可计算出甾醇中各组分的含量：A[%]=Ksample/Kstandard×РKsample--待测样1的相关系数Kstandard--标准品的相关系数Р--所用的菜籽甾醇、菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇标准品的百分含量4.3.2待测样组成成分的测定对由待测样2得到的气相色谱图中除去溶剂峰的所有峰进行归一化基于峰面积确定待测甾醇的组成成分