植物组织培养技术（高教版）电子教案：植物组织培养操作技术01.doc

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1、第2章植物组织培养技术第三节植物组织培养操作技术（1）一、授课章节第三节植物组织培养操作技术（1）。二、学时安排2学时。三、教学目标1.掌握组培的一般工作程序。2.掌握不同类型培养器血和用具的洗涤技术。3.了解常用消毒火菌方法的原理，掌握其操作技术，能根据物品种类正确选用消毒火菌方法。四、教学重点、难点分析重点：常用的消毒灭菌技术。难点：灭菌和消毒的区别及无菌意识的树立。五、教具电化教学设备。六、教学方法讲授法，演示法。七、教学过程I•导入提问：植物纽•织培养实验室的基木构成。木次课主要介绍的是植物纽•织培养洗涤和消毒灭菌技术。II•新课一、洗涤技术植

2、物组织培养除了要对培养材料和接种用具进行严格消毒外，备种用具更要求洗涤清洁，因为各种灭菌方法的有效作用时间都是以材料或川具淸洁为前提的。（一）洗涤液1•洗衣粉、洗洁精洗涤液适用于玻璃器1111和金属类器具的洗涤。2•洛酸洗涤液由重珞酸钾和浓硫酸混合而成，属强氧化剂，对无机离了、灰尘效果好，对油污无效。倂酸洗涤液的配制：称取重倂酸钾50g,加入1L蒸镭水，加热搅拌至完全溶解；冷却后注入90mL浓硫酸，混合均匀即可。刚配好的洗液是棕红色，反复使用至变成青褐色则失效。【注意事项】（1）配制时重铭酸钾溶液…定要冷却麻才能加浓硫酸，且只能把浓硫酸缓慢加入重骼酸钾

3、溶液屮，决不能将重锯酸钾溶液或蒸懾水倒入浓硫酸屮。（2）由于骼酸洗涤液具有极强的氧化能力和腐蚀作用，故不要用手肓接接触洗涤液。（二）各类器皿和用貝的洗涤方法1.新的玻璃器皿：使用前先用1%稀盐酸浸泡12〜24h-＞用毛刷蘸洗衣粉水刷洗干净流水冲洗：3〜4次-＞最后用熬憎水冲淋1遍-＞晾干（或烘干）后备用。2•已用过的培养器皿：除去容器内的残渣一白来水冲洗一浸泡在洗衣粉水屮15〜30min-用毛刷刷洗干净一流水冲洗3〜4次一最后用蒸镉水冲淋1遍一晾干（或烘干）后备用。3.已被霉菌等杂菌污染的器皿：121°C高温高压蒸汽灭lW30min-＞趁热倒去残渣-＞

4、自来水冲洗一浸泡在洗衣粉水中15〜30minf用毛刷刷洗干净一流水冲洗3〜4次一最后用蒸憎水冲淋1遍一晾干（或烘干）后备用。4•移液管、量筒等量器：倂酸洗涤液屮浸泡2h以上一取出后在流水屮冲洗BOmin-蒸催水冲淋1次〜晾干（或烘干）后备用。5.载玻片和盖玻片：洗涤液屮浸泡数小时一水洗一绸布擦干一放在95%的洒精屮备用。6.解剖刀、镶子、剪刀等：新购置金属器1UL因其上有润滑油或防锈油，用醮有四氯化碳的棉布擦去油脂，再用湿布擦净，干燥备用。每次使用后先用洗衣粉水刷洗，再用酒精擦拭。二、灭菌与消毒技术（—）灭菌与消毒的区别1.有菌和无菌的范畴有菌的范畴是

5、：凡是暴露在空气屮的物体，接触H然水源的物体，至少它的表面都是有菌的。无菌的范畴是：经高温灼烧或一定时间蒸漱过示的物体，经其他理化灭菌方法处理示的物体一般可认为是无菌的。1.灭菌与消毒的区别灭菌是指用物理或化学方法杀死物体表面和孔隙内一切微生物或生物体。消毒是指杀死、消除或充分抑制部分微生物，使Z不再发生危害作用。由灭菌和消毒的含义可以看出，二者的主要区别是：灭菌是把所有有生命的物质全部杀死；而消毒主要杀死或抑制物体表瓯的微生物，但芽砲、厚垣砲了一般不会死亡。（二）常用的消毒灭菌方法（过滤灭菌"愿体过滤灭菌濯热灭菌高温灭菌-高压蒸汽灭菌厂物理灭菌汗热灭

6、菌烘烤灭菌灼烧灭菌厂电离辐射灭菌厢射灭菌紫夕嗎射醞超声波辐射灭菌I徽波辐射腿"熏蒸灭菌喷雾灭菌浸泡灭菌、擦拭灭菌图4-15常用的灭菌方法（三）消毒灭菌技术1•环境消毒:方法主要有空气过滤灭菌、紫外线照射消毒、喷雾消毒和熏蒸消毒等。•空气过滤灭菌：成规模的植物组织培养车间可采用空气过滤系统对整个环境进行空气过滤灭菌，这种方法投入较高，操作要求比较严格，一般较少采用。组织培养屮普遍采用的是对无菌操作的微环境进行空气过滤灭菌，如超净工作台的局部无菌环境。•紫外线照射消毒：利用紫外光波照射灭菌，细菌吸收紫外线后，蛋白质和核酸发生结构变化，引起细菌的染色体变异，

7、造成死亡。缓冲间、接种间、培养间等均可采用紫外线照射消毒，一般照射20〜30min。•喷雾消毒：利用70%〜75%的酒精或0.2%的新洁尔灭对环境进行喷雾，既可以起到直接杀死环境屮微生物的作用，又可以使飘浮的尘埃降落，防止尘埃上附肴的杂菌污染培养基和培养材料。•熏蒸消毒：利用加热焚烧、氧化等方法，使化学药剂变为气体状态扩散到空气屮，以杀死空气和物体表面的微生物。常用熏蒸剂是甲醛，熏蒸时，按2mL/n?用量，将甲醛置于广口容器屮，加0.2g/m3高猛酸钾氧化挥发。熏蒸时，房间可预先喷湿，关闭紧密，24h后打开门窗通风。2•用具的消毒灭菌：根据用具种类不同

8、分别采用干热灭菌、湿热灭菌、浸泡消毒、擦拭消毒等方法。•干热灭菌：利用烘箱进行烘烤灭菌的方法，