植物组织培养技术（高教版）电子教案：植物组织培养快速繁殖技术.doc

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1、第2章植物组织培养技术第四节植物组织培养快速繁殖技术一、授课章节第四节植物组织培养快速繁殖技术。二、学时安排2学时。三、教学目标1.掌握植物组培快繁的流穆。2.掌握植物组培快繁的程序。四、教学重点、难点分析重点：植物组培快繁的程序。难点：初代培养中诱导外植体生长与分化途径。五、教具电化教学设备，各培养阶段的试管苗。六、教学方法讲授法，演示法。七、教学过程I•导入木次课主要介绍的是植物组织培养快速繁殖技术。II•新课一、植物组培快繁的流程母体材料一外植体的选择一外植体的处理一外植体的表面消毒一外植体的接种一初代培养一继代培养(多次循环)一壮苗与生根培养一试管苗驯化与移栽二、植物

2、组培快繁的程序(-)外植体的选择1•外植体选择的原则•选择优良的种质外植体一定要选择具有该品种典型特征、遗传性稳定、生长健壮、无病虫害的优良植株。•选择生理状态良好的材料尽量选择幼嫩的、生理状态艮好的材料。•选择生长旺盛、再生能力强的材料在生长季节选择年幼的材料，这样的材料生长旺盛、再生力强，接种成功率高。•选择来源丰富的材料为了建立一个高效而稳定的组培快繁体系，需反复试验，所以一定要选用來源丰富的材料。•选择合适的外植体大小适宜的外植体大小：茎尖分生组织0.2〜0.5mm,茎段长带1〜2个节,叶片0.5cmX0.5cm。2.外植体的选择就无菌短枝杆插、丛生芽培养来说，木木植

3、物、能形成茎段的草木植物以采取茎尖和茎段比较适宜；有些草木植物植株短小或没有显著的茎，可川叶片、叶柄、花萼、花瓣作外植体。(%1)外植依的处理将采来的植物材料除去不用的部分，将需要的部分仔细洗干净，洗时可加入洗衣粉清洗,然后再用自来水冲净洗衣粉水。洗涤结束后，进入无菌操作室进行消毒接种。(%1)外植体的表面灭菌按照无菌操作技术中介绍的方法，打开电源使超净丁•作台处于T作状态，将接种工具、消毒的玻璃器1111、无菌水、配制好的灭菌剂等放入超净工作台，接种员做好准备进入无菌操作室，点燃酒精灯，对接种工具进行灼烧灭菌。外植体每3〜5个为一组放入7()%〜75%的洒精屮浸泡10〜60

4、S-取出示放入2%的次氯酸钠溶液浸泡无菌水反复冲洗3〜5次〜用已灭菌的剪刀或解剖刀将外植体切割到适当大小，准备接种。(0)外植体的接种先打开已准备好的培养基瓶盖或封口膜，将三角瓶倾斜拿在手屮，使瓶口靠近酒精灯火焰，并将瓶口在火焰上方转动灼烧数秒钟。然示用银了夹取一块切好的外植体送入瓶内，轻轻插在培养基上。将叶片背面接触培养基，茎尖、茎段要按其生长极性的上下端，正放在培养基上。外植体接种以每瓶放一•枚组块为宜。接完种后，将瓶口在火焰上再灼烧数秒钟，盖上瓶盖或封口膜。然后再接下一•瓶，直到全部接种完毕。最后做好记录，注明处理材料的物种名称、处理方法、接种口期等。（五）培养1•培养

5、条件（1）温度温度是植物组织培养屮的重要因素，大多数植物组织培养都在23-27°C之间进行，一般采用25土2°C。（2）光照主要表现在光强和光照时间方面。组织培养中多采用2000-3000LX的光强,最常用的周期是16h的光照,8h的黑暗。（3）湿度影响组织培养的湿度包括以下两个方面：培养容器内的湿度和培养室内环境的湿度。一般要求培养室内要保持70%〜80%的相对湿度。（4）培养基的pH不同的植物对培养基最适pH的要求是不同的。大多数植物适宜的pH在5.6〜6.5之间,一般培养基皆要求5.8。（5）渗透压培养基屮由于有无机盐类、蔗糖等化合物，因此，会影响渗透压的变化。通常1〜

6、2个大气压对植物生长有促进作用，2个大气压以上对植物生长有阻碍作用。（6）气体氧气是组织培养中必需的因素，瓶盖封闭时要考虑通气问题，可用附有滤气膜的封口材料。接种时应避免把外植体全部埋入培养基屮，以免造成缺氧。2.培养程序•初代培养初代培养旨在获得无菌材料和无性繁殖系。即接种某种外植体示，最初的几代培养。初代培养建立的无性繁殖系包括：茎梢、芽丛、胚状体和原球茎等。（1）顶芽和腋芽的发育顶芽和腋芽在离体培养屮都可被诱导而生长发冇。从芽萌发变为幼枝，幼枝继续生长,形成新的顶芽和侧芽。再将新形成的芽切割下来继续培养，反复萌生新的枝条，在很短的时间内重复芽一枝一苗的再生过程，就能生产

7、出许多再生小植株。（2）不定芽的发育由外植体产生不定芽，通常首先要经脱分化过程，形成愈伤组织的细胞。然后经再分化形成器官原基。多数情况下它先形成芽，示形成根。即外植体一产生愈伤组织一产生不定芽一产生植株。（3）体细胞胚状体的发生与发育体细胞胚状体类似于合子胚但又有所不同，它也通过球形，心形，鱼雷形和子叶形的胚胎发冇时期，最终发冇成小苗，但它是由体细胞发生的。通过体细胞胚状体产生植株有三个显著的优点：由一个培养物所产生的胚状体数目往往比不定芽的数目多；胚状体形成快；胚状体结构完整，一旦形成都可能頁接萌发形