植物组织培养无菌操作技术

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1、无菌操作技术植物组织培养要求严格的无菌条件及无菌操作技术。无菌操作技术如下：一、接种室的无菌技术无菌操作室或接种室除用甲醛和高锰酸钾按2比1的比例定期熏蒸灭菌，在实验室用甲醛和高锰酸钾封闭消毒器具，不宜进入消毒空间。消毒后通风换气，等气味散尽后再出入。使用前用20%新洁尔灭（苯扎溴铵溶液）对接种室内墙壁、地板及设备擦洗，用70%酒精喷雾（使灰尘迅速沉淀），用紫外线灭菌20分钟或更长，照射期间接种室门要关严。当接种室紫外线消毒期间，工作人员不要处于正消毒的空间内，更不要用眼睛注视紫外灯，也要避免长时间在开着紫外灯的超净工作台内进行操作。一般在接种室用紫外线消毒后，不要立即进入接种室，此时室内充满

2、高浓度的臭氧，会对人体，尤其是呼吸系统造成伤害。应在关闭紫外线灯15-20分钟后再进入室内。二、工作人员的无菌技术工作人员要经常洗头、洗澡、剪指甲，保持个人清洁卫生。在接种室穿医护用的特制工作衣帽。工作衣、帽、口罩也要经常清洗，洗净晾干后用纸包好进行高温高压消毒。工作衣使用前后挂于预备间，并用紫外线照射灭菌。接种前洗手，最好用肥皂水或新洁尔灭、洗手液等清洗，然后用酒精擦洗或喷洒。三、接种器械无菌技术接种时首先要用紫外线照射超净工作台面后，用70%酒精喷雾或擦洗工作台面。工作前送风15-30分钟左右。首先对器械支架进行灼烧消毒，然后对接种工具如手术剪、手术刀、镊子等进行灼烧消毒，方法一般是用70

3、%酒精浸渍、擦拭或喷洒后再酒精灯上灼烧。接种工具灼烧后放在器械支架上冷却待用。接种一定数量材料后，接种器械要重新灼烧灭菌，避免因沾有植物材料或琼脂等引起双重污染和交叉污染。通常采用两套接种工具，使用一套时，另一套灼烧后冷却。对于较大的器械如显微镜等，可用70%酒精擦洗表面，然后用紫外线照射灭菌。继代转接时，要注意对待转接的培养物进行仔细观察挑选，防止将已经污染的培养物继代扩增；放置了很久的试管或三角瓶表面和瓶塞宜用70%酒精棉擦洗。接种器械灼烧时应远离装酒精的容器，更不能刚刚烧完就插入装酒精的容器中，也要避免不小心将酒精容器或酒精灯碰倒后引起失火。另外，在酒精灯点燃后，不宜用酒精溶液喷洒超净工

4、作台。四、接种操作无菌技术接种时，要穿好工作衣，戴好工作帽和口罩，不准说话或对着植物材料或培养容器口呼吸。打开包塞纸和瓶塞、瓶盖时注意不要污染瓶口。在近酒精灯火焰处打开培养瓶瓶口，并使培养瓶倾斜，以免微生物落入瓶内。瓶口可以在拔塞、开盖前灼烧灭菌，接种工作宜在近火焰处进行。手不能接触接种器械的前半部分（即直接切割、触碰植物材料的部分），接种操作时（包括拧开或拧上培养瓶盖时），培养瓶、试管或三角瓶宜水平放置或倾斜一定角度（45度以下），避免直立放置而增大污染机会。手和手臂应避免在培养基、植物材料、接种器械上方经过。已消毒的植物材料接种时不慎掉在超净工作台上，不宜再用。接种期间如遇停电等事件使超净

5、工作台停止运转，重新启动时应对接种器械及暴露的植物材料重新消毒。