SNT 2662-2010 进出口动物源性食品中玉米赤霉醇残留量的检测方法 酶联免疫吸附法.pdf

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1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２６６２—２０１０进出口动物源性食品中玉米赤霉醇残留量的检测方法酶联免疫吸附法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狕犲犪狉犪犾犪狀狅犾狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀犳狅狅犱狊狋狌犳犳狊狅犳犪狀犻犿犪犾狅狉犻犵犻狀犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋—犈狀狕狔犿犲犾犻狀犽犲犱犻犿犿狌狀狅狊狅狉犫犲狀狋犪狊狊犪狔２０１０１１０１发布２０１１０５０１实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局犛犖／犜２６６２—２０１０前言本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和

2、国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国安徽出入境检验检疫局。本标准主要起草人：郑文杰、赵卫东、刘?、贺艳、朱梦栩、万宇平、冯才伟、赵正苗。Ⅰ犛犖／犜２６６２—２０１０进出口动物源性食品中玉米赤霉醇残留量的检测方法酶联免疫吸附法１范围本标准规定了动物性食品中玉米赤霉醇残留量的酶联免疫吸附测定方法。本标准适用于猪肉、牛肉、鸡肉、羊肉和牛奶中玉米赤霉醇残留量的筛选检测。２规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＧＢ／Ｔ６６８２分析实验用水规格和试验方法３

3、方法提要鲜奶样品酶解后稀释即可用间接竞争性酶联免疫吸附法进行检测；肉类样品用乙腈提取玉米赤霉醇，萃取净化后，用间接竞争性酶联免疫吸附法进行检测。４试剂和材料除另有要求外，所有试剂均为分析纯，水为ＧＢ／Ｔ６６８２规定的一级水。４．１乙腈。４．２三氯甲烷。４．３正己烷。４．４葡萄糖苷酸酶／芳基硫酸酯酶。４．５玉米赤霉醇酶联免疫试剂盒（参见附录Ａ）。５仪器和设备５．１均质器。５．２离心机。５．３旋涡混合器。５．４酶标仪。５．５氮吹仪。５．６温育培养箱。５．７单道微量加样器：５０μＬ，１００μＬ，２０μＬ～２００μＬ，２００μＬ～１０００μＬ。５．８多通道微量加样器：５０μＬ～２５０

4、μＬ可调。１犛犖／犜２６６２—２０１０６样品制备与保存从全部原始样品取出有代表性样品约２００ｇ，将均质混匀的样品分成两等份，将分好的试样装入洁净容器，加封并做标识，在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。将试样存放于－２０℃中保存。７样品测定７．１鲜奶样品取１ｍＬ新鲜牛奶到２ｍＬ离心管中，加入８葡萄糖苷酸酶／芳基硫酸酯酶（７７３Ｕ／ｍＬ），置于μＬ３７℃水浴酶解２ｈ；取出２５μＬ于另一２ｍＬ离心管中，加入９７５μＬ复溶液进行稀释，混匀；取出５０μＬ用于分析。７．２肉类样品称取１ｇ（精确至０．１ｇ）样品，加入２ｍＬ去离子水，加入８葡糖苷酸酶／芳基硫酸酯酶混匀，

5、３７℃μＬ水浴酶解２ｈ；取出加入８ｍＬ乙腈，振荡１０ｍｉｎ，３０００ｒ／ｍｉｎ以上离心５ｍｉｎ；取上清液５ｍＬ，加入２ｍＬ三氯甲烷，加入６ｍＬ正己烷，涡旋振荡１０ｍｉｎ，３０００ｒ／ｍｉｎ以上离心５ｍｉｎ；去除上层正己烷，取中间层吹干，加入１ｍＬ复溶液（见附录Ｂ中Ｂ．２）旋涡溶解，取２００到２ｍＬ离心管中，加入８００μＬμＬ复溶液混合，取出５０用于分析。μＬ８测定步骤８．１试剂的制备８．１．１复溶工作液提供的复溶工作液为２×浓缩液。使用前用蒸馏水将复溶工作液稀释２倍使用。８．１．２洗涤液提供的洗涤液为２０×浓缩液。使用前用蒸馏水将浓缩洗涤液稀释２０倍使用。８．２样品检测往酶标

6、板里加标准品／样本５０孔，再加入５０／孔的抗体工作液，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖μＬμＬ板，置于温育培养箱中３７℃反应３０ｍｉｎ。取出用洗涤液按每孔２５０，洗板４次～５次，每次浸泡μＬ１０ｓ，拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。加入酶标二抗工作液１００μＬ孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板，置于温育培养箱中３７℃反应３０ｍｉｎ，取出重复洗板步骤。每孔加入底物Ａ液５０μＬ，再加Ｂ液５０μＬ，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板，于温育培养箱中３７℃避光显色１５ｍｉｎ。每孔加入浓度为２ｍｏｌ／Ｌ的终止液５０，轻轻振荡混匀。于４５０ｎｍ处测定吸光度值（ＯＤ值）（建议用双波长μＬ４５０／

7、６３０ｎｍ检测，加入终止液后在５ｍｉｎ内读完结果）。９结果的计算标准品和样品的百分吸光度值计算方法见式（１）：２犛犖／犜２６６２—２０１０犅百分吸光率＝×１００％…………………………（１）犅０式中：犅———标准品或样品的百分吸光度值；犅０———０标准的百分吸光度值。以百分吸光度值为纵坐标，玉米赤霉醇标准溶液的浓度（ｎｇ／ｋｇ）的半对数值为横坐标绘制标准工作曲线。从标准曲线上得到试样中相应的玉米赤霉醇浓度后，结果按式（２）进行计算：犃×犳犡＝…………………………（２）犿×１０００式中：犡———样品中玉米赤