SNT 2096-2008 食品中丙烯酰胺的检测方法 同位素内标法.pdf

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1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２０９６—２００８食品中丙烯酰胺的检测方法同位素内标法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犪犮狉狔犾犪犿犻犱犲犻狀犳狅狅犱—犐狊狅狋狅狆犲犻狀狋犲狉狀犪犾狊狋犪狀犱犪狉犱２００８０７１７发布２００９０２０１实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局犛犖／犜２０９６—２００８前言本标准的附录Ａ为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中国检验检疫科学研究院负责起草。本标准主要起草人：仲维科、李翔、李礼、刘汉霞、陈冬东、雍炜、邱月明。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ犛犖／犜２０９

2、６—２００８食品中丙烯酰胺的检测方法同位素内标法１范围本标准规定了油炸和焙烤食品中丙烯酰胺的检测方法。本标准适用于油炸和焙烤食品中丙烯酰胺的检测。２测定方法２．１方法提要用水提取试样中的丙烯酰胺，提取液经石墨化碳黑层析柱净化，净化液中的丙烯酰胺经溴水衍生化后，用同位素标记的内标法，气相色谱质谱联用仪（ＧＣＭＳ）检测。２．２试剂和材料除另有说明，所用试剂均为分析纯，水为去离子水或相当纯度的水。２．２．１正己烷：重蒸馏。２．２．２乙酸乙酯：重蒸馏。２．２．３丙烯酰胺标准品：纯度≥９９％。２．２．４（１３Ｃ）标记的丙烯酰胺标准品：１０００ｍｇ／Ｌ。２．２．５丙烯酰

3、胺标准溶液：准确称取适量的丙烯酰胺标准品（精确至０．１ｍｇ），用水溶解，配制成浓度为１０ｍｇ／Ｌ的标准储备溶液。根据需要用水稀释成适用浓度的标准工作溶液。２．２．６（１３Ｃ）标记的丙烯酰胺标准溶液：移取（１３Ｃ）标记的丙烯酰胺标准品１ｍＬ，用水配制成浓度为１０ｍｇ／Ｌ的标准储备溶液。根据需要用水稀释成适用浓度的标准工作溶液。２．２．７无水硫酸钠：６５０℃灼烧４ｈ，置于干燥器内保存。２．２．８石墨化碳黑固相萃取柱：内填石墨化碳黑５００ｍｇ，使用前分别用５ｍＬ甲醇和５ｍＬ水活化。２．２．９溴水：含溴浓度≥３％。２．２．１０氢溴酸：浓度≥４０．０％。２．２．１１玻璃棉

4、。２．２．１２硫代硫酸钠水溶液：０．２ｍｏｌ／Ｌ。２．３仪器和设备２．３．１气相色谱质谱仪，带ＥＩ源。２．３．２旋转蒸发器。２．３．３振荡器。２．３．４冷冻离心机。２．３．５氮吹仪。２．３．６固相提取装置。２．３．７天平（精确到０．００１ｇ）。２．４测定步骤２．４．１提取准确称取已粉碎的样品２０ｇ（精确至１ｍｇ）于（２５０ｍＬ）三角瓶中，加水１００ｍＬ，加１ｍＬ浓度为５００ｎｇ／ｍＬ１３Ｃ３同位素标记的丙烯酰胺内标，振荡３０ｍｉｎ，取上清液２５ｍＬ于５０ｍＬ离心管中，加入１犛犖／犜２０９６—２００８正己烷２０ｍＬ，振荡１０ｍｉｎ，离心（３０００ｒ／ｍｉｎ）５ｍ

5、ｉｎ，弃去正己烷层。２．４．２净化将离心管在１２０００ｒ／ｍｉｎ下，于４℃高速冷冻离心３０ｍｉｎ，上清液用玻璃棉过滤，将滤液加入石墨化碳黑固相萃取柱中，收集流出液，再用２０ｍＬ纯净水淋洗，合并流出液和淋洗液用于衍生化。２．４．３衍生化在净化液中加入７．５ｇ溴化钾，用氢溴酸调节净化液至ｐＨ１～３，再加８ｍＬ溴水，在４℃条件下衍生过夜。滴加硫代硫酸钠溶液至黄色消失以除去残余的溴。将溶液转移到分液漏斗中，加２０ｍＬ乙酸乙酯，振荡１０ｍｉｎ，静置分层，再分别用１０ｍＬ乙酸乙酯提取两次，合并乙酸乙酯提取液。乙酸乙酯过无水硫酸钠后，旋转浓缩并定容至１．０ｍＬ，供气相色谱质

6、谱测定。２．４．４测定２．４．４．１仪器条件ａ）色谱柱：ＨＰ５３０ｍ×０．２５ｍｍ（内径）×０．２５μｍ（膜厚），ＨＰ５（或相当者）；ｂ）色谱柱温度：６５℃（１ｍｉｎ）→１５℃／ｍｉｎ→２８０℃（１５ｍｉｎ）；ｃ）进样口温度：２８０℃；ｄ）离子源温度：２３０℃；ｅ）传输线温度：２８０℃；ｆ）离子源：ＥＩ源；ｇ）测定方式：选择离子监测方式；ｈ）选择监测离子（ｍ／ｚ）：１０６、１５０、１５２、１１０、１５３、１５５；ｉ）载气：氦气，纯度９９．９９９％，流速１．０ｍＬ／ｍｉｎ；ｊ）进样方式：无分流进样；ｋ）进样量：１．０μＬ；ｌ）电子能量：７０ｅＶ。２．４．４

7、．２色谱质谱确证和测定在上述仪器条件下经衍生化的丙烯酰胺保留时间约为８．２６ｍｉｎ。气相色谱质谱选择离子总离子流图参见附录Ａ图Ａ．１。符合下列条件，即可确定样品中含有丙烯酰胺：在保留时间８．２６ｍｉｎ附近有峰出现，选定的质谱碎片离子在样品的选择离子质谱图中都能出现，样品峰的质谱图中各碎片离子的相对丰度为：１５３∶１５５＝１，１５０∶１５２＝１，１０６∶１５０＝０．６，１１０∶１５３＝０．６，以上离子相对丰度的偏差比不超过２０％。以１５０和１５３定量。气相色谱质谱图参见附录Ａ中图Ａ．２和图Ａ．３。２．４．５空白试验除不加试样外，按上述测定步骤进行。２．５结果

8、计算和表示２．５．１丙烯