血浆微量蛋白的测定及临床意义.ppt

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1、血浆微量蛋白的测定及临床意义一、血浆蛋白质测定方法的进展比色法：如总蛋白的测定方法：双缩脲反应法；白蛋白的测定方法：溴甲酚绿法。电泳法：是进一步分离蛋白质的方法。免疫测定法：是利用抗原抗体反应检测标本中微量物质的分析方法。二、免疫测定法的特点特异性好：即某一抗原只与其相应的抗体起反应。敏感性高：可检测出纳克（ng）水平的量免疫测定法包括：1、免疫扩散法：敏感度在ug/ml，因此只能用于检测含量较高的蛋白质。且操作繁琐、时间长，需18-48小时。2、免疫电泳法：是区带电泳与免疫扩散相结合的方法。一般不能定量，仅用于检测异常蛋白成分。3、免疫浊度法：基本原理是：当可溶性抗原与相应抗体特异结

2、合，在二者比例合适，并有一定浓度的电解质存在时，可以形成不溶性的免疫复合物，即沉淀反应。三、免疫浊度法的分类及原理透射免疫比浊法散射免疫比浊法。透射免疫比浊法的原理当一定波长的光线通过抗原抗体反应混合液时，被形成的免疫复合物反射、遮挡或吸收而减弱。在一定范围内，吸光度（A）与IC量呈正相关。因此当抗体量固定时，根据吸光度可计算出抗原量。要求形成的IC达到一定的数量，而且分子颗粒较大，否则难以精确测定，因此检测灵敏度相对较低。散射免疫比浊法的原理光线通过检测溶液时，被反应形成的抗原抗体复合物折射而部分偏转，产生散射光，散射光强度（I）与样本的IC量、散射夹角（θ）成正比，而与入射光波长成

3、反比。滤光器光源散射法检测器透射法检测器反应杯散射免疫比浊法分为终点散射比浊法和速率散射免疫比浊法终点散射免疫比浊法：当反应达到平衡时进行检测，通常需10-30min，且灵敏度较低速率散射免疫比浊法：由于抗原与抗体结合形成免疫复合物的速度在单位时间内时不同的，当反应开始时，进行动力学测定可以发现在某一时间反应速度最快，IC形成最多，散射光强度相应最大，即所谓速率峰（最大反应速率Vmax），Vmax与待测抗原量呈正相关而获得测定。主要优点：快速、灵敏、精密度高、检测范围广四、免疫比浊分析的影响因素抗原抗体的比例：抗原抗体的比例是浊度形成的关键因素。免疫比浊法的基本条件是在保持抗体过剩的情

4、况下测定加入的抗原。但抗体过剩又必须适量。一般原则是先确定某一被测物的正常值，以±50%作为检测范围，抗体在此范围内应保持过剩。抗体的质量：要求抗体有很强的特异性，有较高的效价，以及有高的亲和力。一般采用R型抗体。反应溶液：一般采用PH在7.0左右的磷酸盐缓冲液。增浊剂的作用：一般使用浓度为3%-4%的PEG6000五、Array特定蛋白分析仪的简介原理：采用速率散射比浊法测定速度：40-80结果/小时，每次可检测40个标本。特点：具有抗原过剩识别功能抗原过剩识别在抗体量一定的情况下，免疫复合物生成量随着抗原量的增加而增多，但抗原量超过一定域值后，免疫复合物的量却随之减少，影响检测的准

5、确性。Array360抗原过剩识别功能工作原理在检测到抗原抗体反应速率峰之后，在反应溶液中加入能与过剩抗体反应的微量的Ag，若反应溶液中有过剩抗体存在，则与加入的Ag反应，形成一个过剩抗体峰；若反应溶液中无过剩抗体存在，不能检测到过剩抗体峰的存在。当一个反应，有速率峰和过剩抗体峰同时存在时，仪器将确认第一次出现的速率峰有效，并将结果打印出来；而没有过剩抗体峰存在的反应，仪器将重新对标本进行更高稀释度的稀释，然后再测定结果。速率峰过剩抗体峰ARRAY360的抗原过剩检测六、部分血浆微量蛋白质的临床意义（一）、防卫蛋白免疫球蛋白（Ig）：包括IgG、IgA、IgMIgA临床意义：（1）低I

6、g血症：分先天性和获得性，获得性低Ig血症见于大量蛋白质流失的疾病，如肾病综合症、淋巴网状系统肿瘤等；（2）高Ig血症：见于感染，自身免疫病、肝脏疾病及M蛋白血症等、慢性活动性肝炎IgG和IgM升高明显。SLE以IgG、IgA或IgM升高较多见，类风湿性关节炎则以IgM增高为主。正常参考值：IgG：6.94-16.18g/LIgA：0.6-2.63g/LIgAIgM：0.68-3.78g/L补体：包括C3、C4补体系统是人体抵抗感染甚至肿瘤的多种天然防御机制之一，定量检测各种补体成分有助于诊断免疫功能紊乱临床意义：①补体升高：一般见于各种传染病、组织损伤、急性炎症及肿瘤患者；②补体降低

7、：多见于自身免疫性疾病、SLE、慢性肝病、肾小球肾炎等。参考值：C30.88-2.01g/LC40.16-0.47g/Lκ和λ轻链（KAP和LAM）用于诊断单克隆γ-球蛋白病，主要见于多发性骨髓瘤，除IgG、IgA升高外，可伴有KAP和LAM的过度分泌。参考值：KAP5.74-12.8g/LLAM2.69-6.38g/L（二）、急性时相蛋白（APR）急性时相蛋白是指一组蛋白，它们的浓度在由外科手术、高温、肿瘤、感染或其它原因引起的炎症过程中明显