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1、良性胆管狭窄组织中CTGF表达的意义【摘要】目的：研究良性狭窄胆管组织中CTGF表达的作用.方法：良性狭窄胆管组织23例，正常胆管组织6例，采用免疫组织化学SABC法和原位杂交法检测CTGF和CTGFmRNA的表达.结果：CTGF,CTGFmRNA在良性狭窄胆管组织中主要表达于成纤维细胞胞质内，阳性率分别为82.6%(19/23)和65.2%(15/23);正常胆管组织中少量表达于管壁纤维细胞，阳性率分别为50.0%(3/6)和16.7%(1/6),组间有统计学差异(P<0.05).结论：良性胆管狭窄组织中CTGF呈高表达，是导致胆管良性狭窄的重要因素.【关
2、键词】胆管狭窄结缔组织生长因子免疫组化原位杂交0引言良性胆管狭窄是指由胆道手术、结石、炎症、感染等导致的胆管纤维组织增生、瘢痕挛缩，从而继发形成狭窄，其中医源性胆管狭窄占绝大多数.近年来随着胆道外科技术日益普及和腹腔镜胆囊切除术的普遍开展，医源性胆道损伤的发生率较前增高[1]・目前对于胆管良性狭窄的治疗效果不甚理想，术后再狭窄率较高，根本原因在于对良性胆管狭窄形成机制缺乏认识.结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor,CTGF)是一种新发现的促成纤维细胞分裂和胶原沉积的生长因子.我们通过免疫组织化学SABC法和原位杂交法检测良性胆
3、管狭窄组织中CTGF的表达，探讨其在良性胆管狭窄形成中的作用.1材料和方法1・1材料我院200306/200511手术病理确诊的良性胆管狭窄患者23例，其中胆管损伤及损伤修复术后狭窄17例，肝胆管结石3例，炎性狭窄3例，平均病程（或距前次胆道手术时间）16mo;男10例，女13例，平均年龄50岁；均经胆肠吻合术治疗出院,平均住院时间22d.6例正常胆管组织取自肝移植术中供体胆管.全部标本经40g/L甲醛定，常规石蜡包埋后5Mm厚连续切片.兔抗人CTGFmAb（工作浓度1:300）,SABC试剂盒及CTGF原位杂交检测试剂盒均购自武汉博士德公司.针对人CTGF靶基因
4、的mRNA序列为：①5’CTGCTGCCGCGTCTGCGCCAAGCAGCTGGG3'②5’CAACTGCCTGGTCCAGACCACAGAGTGGAG3’③5’TGTACTACAGGAAGATGTACGGAGACATGG3'・1.2方法免疫组织化学SABC法与原位杂交法，严格按照试剂盒说明操作.用已知CTGF/CTGFmRNA的阳性切片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照.排除非特异性染色的前提下，以胞质内出现黄色、棕黄色颗粒为阳性标记.在高倍镜下随机选取10个视野，计数100个细胞，将阳性细胞所占的百分比<5%,5%〜35%,36%〜65%,>66%分别评
5、分为0,1,2,3分；根据细胞内出现黄色的深浅将无显色、淡黄色、桔黄色、棕黄色分别评分为o,1,2,3分；将二者评分相加除以厶作为该切片的最终评分，将0,1,1.5-2,2.5-3分别评分为卜),(+),(),()・统计学处理：所有数据使用SPSS11.0统计学软件分析，各指标分别计算阳性率；率的比较采用Fisher确切概率法,P<0.05为有统计学差异.2结果CTGF免疫组化及原位杂交产物均定位于胞质内，正常胆管壁纤维细胞少量表达，良性胆管狭窄组织中主要表达于成纤维细胞胞质内，在大部分狭窄胆管中呈阳性表达(图1A,E)・CTGF,CTGFmRNA在良性狭窄
6、胆管组织中的阳性率分别为82.6%和65.2%;在正常胆管组织中的阳性率分别为50.0%和16.7%,组间有统计学差异(P<0.05,表1)•表1CTGF/CTGFmRNA在胆管组织中的表达aP<0.05vs正常.3讨论瘢痕增生是形成良性胆管狭窄的主要原因[2]・在瘢痕形成过程中，肽类生长因子作为炎性细胞与修复细胞之间的信号载体，对修复行为进行调控，在创伤修复中表现岀明显的多功能性.其中转化生长因子P1(transforminggrowthfactorP1,TGFB1)是目前已知与瘢痕形成关系最密切、最有代表性的生长因子，与瘢痕的发生发展密切相关，而且
7、也影响瘢痕挛缩[3・4].人良性狭窄胆管组织中可检测到TGF及其受体高表达于肉芽组织、成纤维细胞、巨噬细胞及血管内皮细胞[5]・因此，TGFpi过量表达或局部持续高浓度可能是导致胆管瘢痕增生的重要原因之一.CTGF目前被认为主要是作为其他分子诱导的生物学作用的调节者和辅助介导因素，促进成纤维细胞分裂和胶原沉积［6］・CTGF能促使I型和皿型胶原、FN等ECM合成，在皮肤、肾脏、肝脏以及心脏纤维化发生中已观察到过度表达［7］・刘剑毅等［8］通过免疫组化法检测CTGF及RTPCR法检测CTGFmRNA的方法，发现CTGF的表达程度与各组织纤维化程度一致.李世荣等［9］
8、发现，体外
