昆虫杆状病毒液化家蚕宿主组织的机制研究.pdf

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1、学校代码：10289分类号：Q78昆密级：公开虫学号：092300024杆状病毒液化家江苏科技大学蚕宿主硕士学位论文组织的机制研究昆虫杆状病毒液化家蚕宿主组织的机制研究彭伟研究生姓名彭伟导师姓名汪汪汪汪生生生生鹏鹏鹏鹏申请学位类别理学硕士学位授予单位江江江江苏苏苏苏科科科科技技技技大大大大学学学学江苏学科专业生物化学与科论文提交日期2020201220121212年年年年4444月月月月20202020日日日日分子生物学技大研究方向家蚕分子生物学论文答辩日期2020201220121212年年年年6666月月月月1111日日日日学答辩委员会主席张国政评阅人2012年6月1日分类号：Q7

2、8密级：公开学号：092300024理学硕士学位论文昆虫杆状病毒液化家蚕宿主组织的机制研究学生姓名彭伟指导教师汪生鹏副研究员江苏科技大学二O一二年六月AThesisSubmittedinFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofScienceTheMechanismofLiquefactionofSilkworm,BombyxmoriHostInfectedwithBaculovirusSubmittedbyPengWeiSupervisedbyDr.WangShengpengJiangsuUniversityofScience

3、andTechnologyJune,2012学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权江苏科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行

4、检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于：(1)保密□，在年解密后适用本授权书。(2)不保密□。学位论文作者签名：指导教师签名：年月日年月日摘要摘要杆状病毒感染昆虫后会造成虫体的液化现象，这有利于病毒向周围环境扩散。家蚕核型多角体病毒（Bombyxmorinucleopolyhedrovirus，BmNPV）对家蚕的感染也证实了这一观点，而苜蓿银蚊夜蛾核型多角体病毒（Autographacaliforniamultiplenucleopolyhedrovirus，AcMNPV）感染家蚕后不会造成宿主组织的液化。虫体液化主要是由杆状病毒编码的组织蛋白酶

5、（V-CATH）和几丁质酶（V-CHIA）活性造成的。为了调查AcMNPV不液化家蚕宿主组织的原因，首先利用大肠杆菌表达系统大量表达AcMNPV-CATH和BmNPV-CATH、AcMNPV-CHIA和BmNPV-CHIA，并利用Ni-NTA柱亲和层析技术对两组酶蛋白进行纯化。结果显示，两组酶蛋白均能在大肠杆菌BL21(DE3)plysS菌株中正确表达，但表达产物主要是以包涵体形式存在，而且与Ni-NTA柱结合较差；改用Ni-NTA柱变性亲和纯化和复性处理后，得到较高纯度的可溶性V-CATH，但仍未能得到V-CHIA。分别比较两组酶蛋白的活性，发现BmNPV-CATH活性纯化前较AcM

6、NPV-CATH低27%，纯化后较AcMNPV-CATH低2%；BmNPV-CHIA活性与AcMNPV-CHIA没有明显差异。上述结果说明，家蚕感染AcMNPV后不出现液化现象可能不是AcMNPVv-cath和v-chiA基因序列与BmNPVv-cath和v-chiA基因序列差异所造成的。其次，利用Bac-to-Bac系统将BmNPV的v-cath（Bmcath）、v-chiA（BmchiA）同时或分别重组到AcMNPV的极晚期强启动子Pp10和Ppolh下游，并以同样的方法将AcMNPV自身v-cath（Accath）、v-chiA（AcchiA）同时或分别重组到AcMNPV上，从而

7、构建6种重组AcMNPV。结果显示6种重组AcMNPV均能感染家蚕，并造成家蚕宿主组织的液化，说明重组AcMNPV中v-cath和v-chiA的过量表达在病毒对家蚕组织液化过程中发挥了重要作用。对感染6种重组AcMNPV之间的蚕体液化发生时间和液化率进行比较，结果显示相对于v-chiA，v-cath对组织液化的作用可能更加直接。对AcMNPV和重组AcMNPV感染家蚕血淋巴中的组织蛋白酶和几丁质酶活性测定，结果表明组织蛋白酶和几丁质酶活性分别随