课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 (2).pptx

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1、课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验设计土壤中分解尿素的细菌的分离与记数1.土壤取样2.制备培养基3.样品稀释、取样涂布4.微生物的培养、观察并记录结果5.细菌的计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。实验步骤1．土壤取样制备5个牛肉膏蛋白胨培养基和15个选择培养基，准备好无菌试管和移液管。实验步骤2.制备培养基制备5个牛肉膏蛋白胨培养基和15个选择培养基，准备好无菌试管和移液管。注：每个稀释度下需要3个选择培养基（平行重复原则），1个牛肉膏蛋

2、白胨培养基。选用稀释倍数为103~107的稀释液。实验步骤2.制备培养基为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？因为土壤中各类微生物的数量(单位：株/kg)是不同的，例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。因此，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。测定土壤中细菌的数量，一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养；测定放

3、线菌的数量，一般选用103、104和105倍稀释液；测定真菌的数量，一般选用102、103和104倍稀释液。注：样品的稀释将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中,充分摇匀，吸取上清液1mL，转移至盛有9mL水的无菌试管中，依次等比稀释至107稀释度，并按照由107至103稀释度的顺序分别吸取0.1mL进行平板涂布操作。按照浓度从低到高的顺序涂布平板，不必更换移液管。实验步骤3.样品稀释、取样涂布注意：由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一个较为宽泛的范围：稀释倍数为103～107。将涂布好的培养皿放在30℃下培养。

4、比较牛肉膏培养基和选择培养基中菌落的数量、形态等，并做好记录。4.微生物的培养、观察并记录结果不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。细菌一般在30~37℃的温度下培养1~2d；放线菌一般在25~28℃的温度下培养5~7d；而霉菌一般在25~28℃的温度下培养3~4d。注：一般来说，在一定的培养条件下(相同的培养基、温度及培养时间)，同种微生物表现出稳定的菌落特征。菌落形状、大小、隆起程度和颜色当菌落数目稳定时，选取菌落数在30~300的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据平板

5、所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。实验步骤5.细菌的计数操作提示[一]无菌操作1、取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都需要灭菌。2、应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。3、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。[二]做好标记注明培养基种类、培养日期、平板培养样品的稀释度等。[三]规划时间课题延伸CO（NH2）2+H2OCO2+2NH3脲酶pH升高指示剂（酚红）将变红挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含酚红培养基的斜面中，观察能否变红。1、结合对照，分析培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基

6、是否筛选出一些菌落。2、是否获得了某一稀释度下，菌落数目在30——300的平板。在这稀释度下，是否至少有两个平板的菌落数相近？3、你统计的每克土壤中含有能分解尿素的细菌的菌落数是多少？与其他同学的结果接近吗？如果差异很大，可能是什么原因引起的？结果分析与评价——滤膜法以测定饮用水中大肠杆菌的数目为例。将已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养液基上培养。在该培养基上，大肠杆菌的菌落呈现黑色。可以根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。微生物计数