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《课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 (2).pptx》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数二一一、研究思路二一二一二一二、实验设计二一探究点一探究点二问题导引什么样的培养基能把土壤中分解尿素的细菌筛选出来?对筛选出的菌种如何作进一步的鉴定?要把某种微生物从众多微生物中筛选出来,就要利用其代谢特点选择合适的培养基。下面是本课题使用的选择培养基配方,请分析回答问题。探究点一探究点二(1)在该培养基的配方中,为微生物提供碳源的是葡萄糖,提供氮源的是尿素。(2)绝大多数微生物都能利用葡萄糖,但是,只有能合成脲酶的微生物才能利用尿素。(3)分析该培养基的配方,该培养基对微生物是否具有选择作用?如果具有,又是如何进行选择的?答案:具有。以尿素为唯一氮源的培
2、养基可以分离到能产生脲酶的微生物(即能分解尿素的微生物)。(4)判断选择培养基是否具有筛选作用,还需同时接种到牛肉膏蛋白胨固体培养基上进行培养,观察同一稀释度的菌液接种的两种培养基上菌落的数目(其他条件相同且适宜),进行对比得出结论。(5)分解尿素的细菌能通过合成的脲酶,将尿素分解成氨,使培养基pH升高,故若在上述培养基中加入酚红指示剂,培养某种细菌后,指示剂变红,则可以说明该种细菌能分解尿素。探究点一探究点二归纳提升选择培养基探究点一探究点二问题导引给你一把无菌铁铲,到哪里去取土样能得到分解尿素的细菌?统计菌落数目时应注意什么?下面是土壤中尿素分解菌的分离与计数的实验流程示意图,请结合教材提
3、供的资料分析回答问题。探究点一探究点二探究点一探究点二(1)请完善下列实验流程。土壤取样:从肥沃、湿润的土壤中,用无菌小铁铲铲去表层土,迅速取土壤并装入无菌信封密封↓制备培养基:制备以尿素为唯一氮源的选择培养基↓样品的稀释:在火焰旁称取土壤10g,放入盛有90mL无菌水的三角烧瓶中,振摇使土样与水充分混合,将菌分散。制成101倍土壤稀释液,用一支1mL无菌吸管从中吸取1mL土壤悬液注入盛有9mL无菌水的试管中,吹吸三次,充分混匀,制成102倍土壤稀释液,以此类推,制成103,104,105,106倍土壤稀释液↓探究点一探究点二取样涂布:取9个上述选择培养基分成三组,并做好标记,然后用三支1mL
4、无菌吸管分别从104,105,106倍的三种土壤稀释液中吸取0.1mL对号放入已做好标记的平板中,用无菌涂布器在培养基表面轻轻地涂布均匀↓培养观察:将培养基平板倒置于30~37℃温室中培养1~2天,每隔24h统计一次菌落数目,选取菌落数目稳定时的记录作为结果↓菌落计数探究点一探究点二(2)请设计记录和计数的表格,以便进行结果统计。答案:探究点一探究点二(3)该实验是用活菌计数法进行计数的。①该方法在同一稀释度下,至少涂布3个平板作为重复组。分析结果时,需考虑重复组的结果是否一致,如果结果差异太大,则意味着操作有误,需要重新实验。②为了保证结果准确,一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。(
5、4)除上述方法外,细菌的计数还可用显微镜直接计数法等。探究点一探究点二归纳提升细菌的计数方法(1)显微镜直接计数法利用特定细菌计数板或血细胞计数板,在显微镜下对细菌进行直接计数,计算一定容积的样品中细菌的数量。(2)稀释涂布平板法(间接计数法、活菌计数法)①原理:当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌,通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。②计算公式:每克样品中的菌株数=C/V×M,其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数,V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL),M代表稀释倍数。类型一类型二类型三类型一选择培养基的特点和应用【
6、例1】现有两种固体培养基,已知其配制时所加的成分和含量(单位:g)如下表(除水、琼脂外),用这两种培养基分别去分离土壤中的两种微生物,下列叙述正确的是()类型一类型二类型三A.甲培养基适于分离自养型自生固氮菌;乙培养基适于分离异养型自生固氮菌B.甲培养基适于分离异养型自生固氮菌;乙培养基适于分离自养型自生固氮菌C.甲培养基适于分离酵母菌;乙培养基适于分离真菌D.甲培养基适于分离自养型共生固氮菌;乙培养基适于分离异养型共生固氮菌解析:固氮菌中能独立生存的是自生固氮菌。甲培养基中含有有机碳源(葡萄糖和淀粉),无氮源,由此推出该培养基适于分离异养型的自生固氮菌;乙培养基中不含有机碳源,也不含氮源,所
7、以可用来分离自养型的自生固氮菌。答案:B类型一类型二类型三方法点拨自养微生物可以利用无机碳源,异养微生物只能利用有机碳源;固氮菌能利用空气中的氮气,非固氮菌不能利用空气中的氮气,培养基中需加入氮源。类型一类型二类型三变式训练1甲、乙、丙是三种微生物,表中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ是用来培养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在Ⅲ中正常生长繁殖;甲能在Ⅰ中正常生长繁殖,而乙和丙都不能;乙能在Ⅱ中正常生长繁殖,甲、丙都
