实验14 微生物纯培养技术.doc

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1、实验14微生物纯培养技术一一划线法一、实验原理微生物学中将实验室条件下从一个单细胞繁殖得到的后代称为纯培养，人们希望研究或利川某种微生物常常必须是一种微生物的纯培养后代。但微生物在土壤、水、空气或人及动、植物体中，不同种类的微生物绝大多数都是混杂生活在一起，欲获得某种微生物吋，就必须从混杂的微生物类群中分离它，以得到只含有这一种微生物的纯培养；另外，若人们原有用于试验研究与利用的微生物纯培养菌株，因接种转管以及保存不当等原因而被非目的菌种污染后，也必须再次进行菌种的纯化将污染的杂菌除去，以重新获得日的菌株纯培养。这种

2、获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。为了获得某种微生物的纯培养。一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同，而供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长，而抑制其他菌生长的环境，从而淘汰其他一些不需要的微生物，再用稀释涂布平板法、稀释混合平板法、平板划线分离法、单抱分离法、挑取菌丝先端等方法分离、纯化该微生物，从而得到纯菌株。半菌种被其他杂菌污染时或混合菌悬液常用划线法进行纯化(纯种分离)。此法是借助将蘸有混合菌悬液的接种环在平板表面多方向连续划线，使混杂的微生物细胞在平板表面分散，经培养得

3、到分散成由单个微生物细胞繁殖而来的菌落，从而达到纯化的目的。二、实验器材1、培养基：牛肉膏蛋白月东琼脂培养基、马铃薯葡萄糖糖琼脂培养基(PDA)；2、菌种：供试的细菌及霉菌的斜面菌种、3、其它器材：灯用酒精、标签纸、无菌水、接种环、青霉素、无菌室三、操作步骤1、培养基平板的制备将备用的牛肉膏蛋白月东琼脂培养基和马铃薯葡萄糖琼脂培养基加热融化，待加热冷却至45-50°C分别倒入90mm的无菌培养皿内，每个培养皿倒入培养基20ml,冷凝后贴上标签、并标明培养基的名称及自己的姓名。2、菌悬液的制备取青霉菌、曲霉2种霉菌及大

4、肠杆菌的斜面菌种试验各1支，倒入少量无菌水后以接种环刮菌苔表面，将细菌的细胞与霉菌的抱子洗下，倒入一无菌的三角瓶或培养皿，然后加入适量的无菌水稀释混匀得试验用的菌悬液。3、取菌液将移菌环浸入菌悬液内，取一环菌液。4、平板划线将有菌液的移菌环按图所示方法，在制备的牛肉膏蛋白月东琼脂培养基平板和马铃薯葡萄糖琼脂培养基平板上来回划线。5、培养观察划线后的平板分别倒置放于适宜的温度下培养，24、36、42小吋后进行观察平板上菌的生长情况。6、挑单菌落将培养长出的单个菌落后，分别挑取接种到上述培养基的斜面上，再于置适宜温度下培

5、养，待菌苔长出后，检查菌苔是否单纯，也可用显微镜涂片染色检查是否是单一的微生物，若有其他杂菌混杂，就要再一次进行分离、纯化，直到获得纯培养。1、在倒平板时可在培养基中添加某些药物如，在马铃薯蔗糖培养基中加入适量的青霉素等药物，以减少细菌对青霉菌等霉菌纯化的干扰。2、实验操作过程中应在无菌室内进行无菌操作。3、培养基不宜太溥，而且要厚薄均匀、表面光滑五、作业1、交1支经划线纯化后的斜面纯培养菌株试管1支。2、简述微生物划线纯化的原理与操作步骤六、微生物纯化方法示意图1、划线纯化法2开始处AB2、稀释涂布法13、稀释混合

6、平板法Originalsample微生物的纯培养技术实验准备事项：1、培养基：牛肉膏+蛋白月东+琼脂培养基、PDA培养，2种培养基各准备平板60套、斜面60支。2、菌种：青霉菌、大肠杆菌、金色葡萄球菌、酵母菌斜面菌种各8支。3、其它器材：灯用酒精、标签纸、无菌水8瓶（每瓶100ml）、150ml无菌三角瓶8个、接种环20支、青霉素8瓶、无菌室、曲玻棒15支。2005-6-1