[精品]2专题1微生物的实验室培养.doc

《[精品]2专题1微生物的实验室培养.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、课题1微生物的实验室培养教学目标：了解有关培养基的基础知识；掌握培养基的制备、高压蒸汽灭菌和平板划线法等基木操作技术。分析实验思路的确定和形成的原因，分析实验流程，对比前面的实验设计，归纳共性,分析差异，增加印彖。教学重点：无菌技术的操作1.基础知识1.1培养基的种类包括培养基和培养基等。琼脂在配制培养基屮用作为。【补充】培养基的类型及其应用:标准培养基类型配制特点主要应用物理性质固体培养基菌种分离，鉴定，计数液体培养基T业生产，连续培养1.2培养基的化学成分包括四类营养成分。K思考2》从细胞的化学元素组成来看，培养

2、基屮为什么都含有这些营养成分？【补充】確源：如0）2、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能星。氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白腺等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。含有C、H、0、N的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。1.3培养基除满足微生物生长的—、和等要求。【补充】生长因了：某些微生物正常生长代谢过程屮必须从培养基屮吸收的微量有机小分了,如某些氨基酸、碱基、维生素等。K思考3》牛肉膏和蛋白月东主要为微生物提供、和等营养物质。K思考4》培养乳酸杆菌时需要添加,

3、培养霉菌时需要将培养基pH调节为_,培养细菌时需要将pH调节为。阅读“无菌技术”，讨论回答下列问题：1.4获得纯净培养物的关键是。1.5无菌技术包括：（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行;（2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行:（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在旁进行；（4）避免已灭菌处理的材料用具与相接触。1.6比较消毒和灭菌（填表）比较项理化因素的作用强度消灭微生物的数量芽抱和抱了能否被消灭消毒较为温和火菌强烈K思考5》无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是一防II••感染实验操作者。1

4、.7消毒方法：（1）LI常生活经常用到的是消毒法；（2）对一些不耐高温的液体，则使用消毒法（作简要介绍）；（3）对接种室、接种箱或超净王作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果，然示使川紫外线进行物理消毒。（4）实验操作者的双手使川进行消毒；（5）饮水水源用氨空进行消毒。1.8灭菌方法：(1)接种环、接种针、试管口等使用灭菌法；(2)玻璃器1111、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是;(3)培养基、无菌水等使用,所用器械是。(4)表一血灭菌和空气灭菌錚使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。K思考63对接种环灭菌

5、时要用酒精灯的充分燃烧层火焰灼烧可能伸入试管或培养川1■的部位。K思考7》利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是避免妨碍热空气流通。K思考孙物品装入高压蒸汽火菌锅火菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气其日的是一有利于锅内温度升高:随后关闭排气阀继续加热，气压升至,温度为,并维持15〜30min；最示切断热源，使温度自然降温，气压务必降至玉时打开锅盖，其目的是防止容器屮的液体暴沸。【补充】培养基的配制原则：%1H的要明确：根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基的类型和配制量。%1营养要协调

6、：培养基屮各种营养物质的浓度和比例要适宜。例如：碳氮比4：1时，谷氨酸棒状杆菌大量繁殖而产生谷氮酸少；碳氮比为3：1时，菌体繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。%1pH要适宜：细菌培养基pH中性或偏碱性，霉菌培养基呈酸性。1.实验操作1.1计算：根据配方比例，计算100汕培养基各成分用量。1.2称量:准确称取各成分。1.3溶化：①加水加热熔化牛肉膏；②加入蛋刨东和氯化钠继续加热；③加入琼脂；④用蒸馆水定容到lOOmLo整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。1.4调pH：用Imol/LNaOH溶液调节pH

7、至偏碱性。1.5灭菌：将配制好的培养基转移到锥形瓶屮，加塞包扎后用高压蒸汽灭菌锅灭菌；所用培养1111用报纸包扎后用干热灭菌箱灭菌。1.6倒平板：待培养基冷却至50°C左右时在酒精灯火焰附近操作进行。过程是：①在火焰旁右手拿锥形瓶，左手拔出棉塞；②右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰；③左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培养1111,立刻盖上血盖。④待平板冷却凝同后，将平板倒过来放置。K思考12锥形瓶的瓶II通过火焰的Id的是消火瓶II的杂菌，防止杂菌感染培养基。K思考23倒平板的H的是防止培养基冷却过程

8、屮形成的水滴落到培养基表面。K思考3》若川L盖和川L底之间粘有培养基，则该平板能否培养微生物？为什么？不能。空气屮杂菌会在这些粘附培养基上繁殖，并污染1UL内培养基。K思考4》配制斜面培养基中，试管要加塞棉塞的Id的是保持通气并防止杂菌感染。K思考5》试管培养基形成斜面的作用是增大接种面积。2.7接种2.7.1微生物接种的最常用方法是和,另外还