临床免疫学—单个核细胞的分离.ppt

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1、单个核细胞的分离与活性鉴定临床免疫学检验教研室实验目的掌握外周血单个核细胞分离操作基本步骤、注意事项；了解分离免疫细胞的常用方法。实验原理各种血细胞的体积、形态、密度不同；红细胞和粒细胞的密度较大，为1.092左右；淋巴细胞和单核细胞的密度为1.075～1.090；血小板为1.030～1.035。利用一种密度介于1.076～1.090之间、近于等渗的聚蔗糖-泛影葡胺进行密度梯度离心，从而分离不同类别的血细胞；台盼蓝染色原理试剂和器材1.淋巴细胞分离液；2.标本肝素抗凝外周血；3.生理盐水；4.0.5%

2、台盼蓝染液5.离心机；6.显微镜；7.试管、玻片实验步骤1.先取2ml淋巴细胞分离液于离心管中；2.另取一干净试管，依次加入2ml生理盐水和2ml外周血，并混匀；3.沿管壁缓慢将稀释外周血叠加到淋巴细胞分离液上；4.配平后，离心2500rpm，20min；5.小心吸出云雾层，移入另一试管；6.加入2~4X体积生理盐水，混匀，2000rpm离心10min,弃上清；7.将细胞重悬，加等体积台盼蓝染液混匀，静置5min后，镜下计数200个细胞，计算活细胞率。结果判断及分析1.活细胞折光性强，胞膜光滑，对染料

3、排斥，拒染；2.死细胞胞膜不完整，通透性增加，镜下可见被染成蓝色；活细胞率=活细胞数/总细胞数X100%注意事项1.全程操作动作要轻，防止机械损伤；2.淋巴分离液直接加入管底，避免浸沾管壁；3.加样顺序，切勿颠倒；4.离心前要配平，第一次离心时，要调至自然降速；5.收集目的细胞时，尽量避免吸入分离液。方法学评价操作简单，成本低，基本能够满足临床和科研需要；纯度不够。思考题1.现分离得到4ml单个核细胞悬液，镜下用细胞计数板计数周围4大格，计数结果为600，现欲将其浓度调整为1X106/ml,应如何校正

4、？离心前离心后