白木香MAPK3基因的克隆及其表达初探.pdf

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3、／■穿焉里覇ｉ窜４．籌．一ｉ．－；Ｉ＇Ｖ一妒Ｉ霸誦１縷？：．．．潘ｊ．转攘学校代码：１０２２５学号：Ｓ１５４３０学化冷文白木香ＭＡＰＫ３基因的克隆及其表达初探Ｗ美慧指导教师姓名一；杨洪申请学位级别；硕±学科专业：微生物学论文提交日期；２０１５年４月论文答辩日期：２０１５年６月授予学位单位；东北袜业大学授予学位日期；２０１５年６月答辩委员会主席；王立群教授论文评阅人：束此抑４欠學ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＣｏｄｅ：

4、１０２２５ＲｅｇｉｓｔｅｒＣｏｄ：Ｓ１５４３０ＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅＤｅｇｒｅｅｏｆＭａｓｔｅｒ‘ＣｌｏｎｉｎｇｏｆＭＡＰＫ３ｇｅｎｅｆｒｏｍ幻ｎ口及ａｎｄｒｅｌｉｍｉｎａｒｓｔｕｄｏｆｅｘｒｅｓｓｉｏｎｐｙｙｐＣａｎｄｉｄａｔｅ：ＸｉａｎＭｅｉｈｕｉＳｕｅｒｖｉｓｏｒ：ＹａｎＨｏｎｉｐｇｇｙ乂ｓｓｏｃｉａｌｔｅＳｕｅｒｖｉｓｏｒ：ＭａｓｔｅｒｐＡｃａｄｅｍｉｃＤｅｇｒｅｅＡｐｐｌｉｅｄｆｏｒ：Ｍａｓ

5、ｔｅｒｏｆＳｃｉｅｎｃｅＳｐｅｃｉａｌｉｔｙ：ＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙＤａｔｅｏｆＯｒａｌＥｘａｍｉｎａｔｉｏｎ：Ｊｕｎｅｏｆ２０１５Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ：ＮｏｒｔｈｅａｓｔＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｍ摘要ＭＡＰＫ信号级联系统在植物生长发育、生物胁迫和非生物胁迫反应、激素反应等多种信号传递途径中起着十分重要的作用，它负责外来信号的接收传递和放大，从而启动或调控基因的表达。珍稀溺危植物白木香是国产沉香的重要来源，健康白木香树只有受

6、一到外界伤害后才能形成沉香类物质。前期研究中，我们从白木香中鉴定了个显著受伤ＡＳＳ一１害诱导表达的倍半鹿合酶基因，并初步鉴定了系列在伤害反应中与ＡＳＳ１协同表达的转录因子和蛋白激酶，其中包括ＭＡＰＫ信号级联系统。本论文在此基础上：，对ＡｓＭＡＰＫＪ基因进行克隆与表达分析－ＰＣ民和ＲＡＣＥ的方法克隆到白木香ＡＳＭＡＰＫｃ１．利用ＲＴ３基因的全长ＤＮＡ序列，开放阅读框长１１１０ｂ码３６９ｐ，编个氨基酸。基于氨基酸序列的系统进化分析显示一，本研究获得ＭＡＰＫ３基因与甜瓜的的ＭＡ

7、ＰＫ３基因形成个小的进化枝。预测分析５显示ＡＳＭＡＰＫ３为亲水性蛋白且为不稳定蛋白，不稳定系数为４１．１５，等电点ｐｉ．４２，亚细胞定位结果显示，ＡＳＭＡＰＫ３主要集中在细胞核上。２．Ｗ白木香根、茎、叶为实验材料，对ＡＳＭＡＰＫ３基因的组织表达情况进行了分析，结果表明，ＡＳＭＡＰＫ３在叶子中的表达量最高，其次是茎，花中的表达量最低。对白木香的悬浮细胞进行荣莉酸甲酷和水杨酸两种化学伤害处理，研究在伤害胁迫下的表达模式，结果显示，伤害信号可Ｗ调控ＡＳＭＡＰＫ３基因表达，在伤害

8、处理２４ｈ内，基因的表达量有提高，随后均有明显降低。基因在不同伤害处理下表达量有所不同。３．利用基因枪法对ＡＳＭＡＰＫ３的亚细胞定位进行研究，结果显示ＡＳＭＡＰＫ３在洋葱表皮细胞中定位于细胞膜和细胞核。－２－ｓ４胸建ｐＥＴ８ａＡＭＡＰＫ３的原核表达载体，通过设计不同的温度、转速及ＩＰＴＧ°的浓度摸索融合蛋白的最适诱导表达条件。结果湿示，在３７Ｃ下，０４ｎｉＭＩＰＴＧ诱导．４ｈ，成功诱导出目的融合蛋白。一ＡＡＰＫ本论文的结果将为进步研