植物组织培养实验(2).ppt

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1、实验二　黄瓜无菌苗愈伤组织的诱导（一）实验目的掌握黄瓜无菌苗愈伤组织的诱导技术，熟悉植物组织继代培养操作过程。（二）实验原理在一定的条件下，不同器官（根、茎、叶等）来源的外植体均可以脱分化形成愈伤组织。（三）实验材料和用具实验材料：黄瓜无菌苗实验药品：MS、1mg/mlNAA、1mg/ml6-BA、1mol/LHCl、1mol/LNaOH、蒸馏水、灯用酒精、70％酒精、无菌水。灭菌培养基：MS1（MS+1.0mg/LBA+0.5mg/LNAA）实验用具：天平、烧杯、玻璃棒、量筒、移液枪、三角瓶、pH试纸、电炉、高压灭菌锅。

2、无菌室、无菌滤纸、无菌培养皿、烧杯、解剖刀、镊子、剪刀、酒精灯、酒精棉花、滴管、记号笔、废液罐、火柴、光照培养箱。（四）实验步骤配制以下培养基各100ml：MS2：MS+2.0mg/LBA+0.1mg/LNAAMS3：MS+2.0mg/LBA+0.5mg/LNAAMS4：MS+2.0mg/LBA+2.0mg/LNAA取200ml烧杯3只，标记，各加入4gMS培养基和100ml蒸馏水，加热直至完全溶解。各加入1mg/ml6-BA200µl，并不断搅拌。分别加入1mg/mlNAA10、50、200µl，并不断搅拌。用1mol/

3、LHCl或NaOH调节pH至5.8～6.0。分装。将3种培养基分别分装到4个三角瓶中，做好标记。灭菌。用高压蒸汽灭菌锅在121℃、0.1MPa条件下灭菌15～20min。操作按仪器操作步骤进行。灭菌后待压力下降到0Pa时取出，凝固后待用。4.接种进入无菌室，用70％乙醇擦洗双手和工作台面，点燃酒精灯。解开三角瓶的绳子，将三角瓶按使用先后顺序排好。再次消毒双手和工作台面，取出无菌滤纸，用无菌水润湿。在火焰边打开三角瓶的封口纸，烧灼瓶口和镊子，待镊子冷却后取出无菌苗，放置在无菌滤纸上。剪成5～10mm小段（根部去掉部分根尖，叶

4、片去叶缘后剪成50mm2左右的小片），每平皿接种3～5段（片）。每组接种8瓶，根、茎段、茎尖、叶各2瓶。光照培养箱25℃暗培养。作业1周后观察培养体系有无污染，计算每一个平皿内染菌外植体数和外植体外的菌落数，分析染菌原因。1周后计算每种外植体的愈伤组织诱导率（形成愈伤组织的外植体数/总接种外植体数×100％）。实验报告内容实验名称实验目的实验原理实验材料和用具实验步骤实验结果与分析