植物组织培养实验.ppt

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1、植物组织培养实验实习董雯生物技术教研室内容1.实习实验（1）培养基母液的配制（MS培养基）（2）培养基制备与灭菌（3）初代培养（外植体接种）（4）继代培养（5）生根培养2.实习报告撰写母液配制流程图按照扩大倍数称量母液分装确定培养基溶解定容贴标签保存于冰箱按顺序混合实验一培养基母液的配制（MS培养基）实验方法及步骤1.大量元素母液的配制MS培养基中大量元素共有5种（表1），按照培养基配方的用量，把各种化合物扩大5倍，用电子天平，分别用50ml烧杯称量。并在每只烧杯中加入30－40ml重蒸馏水溶解。溶解时，可置于酒精灯上略加热或电

2、炉上加速其溶解（但要注意温度不可过高）。然后混合按表1顺序定容于500ml重蒸馏水中。表1MS培养基大量元素的称量及定容（5×）KNO319009500NH4NO316508250KH2PO3170850MgSO4.7H2O3701850CaCl2.2H2O4402200定容于500ml重蒸馏水中，最后加入CaCl2.2H2O，每升培养基取此液100ml在混合定容时，必须最后加入氯化钙，因为氯化钙易与磷酸二氢钾形成磷酸三钙、磷酸钙之类不溶于水的沉淀。将配好的混合液，倒入储液瓶中，贴好标签保存于4℃冰箱中。配制培养基时，每配

3、1000ml培养基取此液100ml。2.微量元素母液的配制微量元素母液按照培养基配方用量的50倍，用感量为0.0001g的电子分析天平，分别称取后各放入50-100ml的烧杯中，加蒸馏水约50ml溶解，然后混合定容于500ml容量瓶中，转移到储液瓶中，贴好标签保存于4℃冰箱。配制培养基时，每配制1000ml培养基取此液10ml。表2MS培养基微量元素的称量及定容（50×）MnSO4.4H2O22.31115ZnSO4.7H2O8.6430CuSO4.5H2O0.0251.25H3BO36.2310Na2MoO4.2H2O

4、0.2512.5KI0.8341.5CoCl2.6H2O0.0251.25定容于500ml重蒸馏水中，每升培养基取此液10ml3.铁盐母液的配制铁盐如果用柠檬酸铁，则和大量元素一起配成母液即可。但目前常用的铁盐是硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯合物，必须单独配成母液。这种螯合物使用起来方便，比较稳定，且不易发生沉淀。这种母液的配制方法是：用电子天平称取2.78g硫酸亚铁（FeSO4.7H2O）和3.73g乙二胺四乙酸二钠（Na2-EDTA.2H2O），分别用约200ml蒸馏水溶解，并分别加热煮沸，然后混和两种溶液继续煮沸，冷却后定

5、容至500ml，冰箱4℃低温保存。配制培养基时，每配制1000ml培养基取此液5ml。表3MS培养基铁盐母液的称量及定容（100×）FeSO4.7H2O27.82780Na2-EDTA.2H2O37.33730定容于500ml重蒸馏水中，每升培养基取此液5ml4.有机物成分的配制在MS培养基配方中，有机物成分有维生素和氨基酸（表4），由于用量小，也应配成母液。按培养基配方用量的50倍，用感量为0.0001g的电子分析天平分别称取后放入100ml的烧杯中，加重蒸馏水或蒸馏水约80ml溶解，然后混合定容于500ml容量瓶中，转移到

6、储液瓶中保存于4℃冰箱。配制培养基时，每配制1000ml培养基取此液10ml。表4MS培养基有机物成分的称量及定容（50×）烟酸0.525盐酸吡哆醇(维生素B6)0.525盐酸硫胺素(维生素B1)0.420甘氨酸2.0100定容于500ml重蒸馏水中，每升培养基取此液10ml由于肌醇用量较大，在配制培养基时单独直接称量加入消毒剂：200ml×23ml/100ml的次氯酸钠（15－25min）酒精：200ml×275％左右（）（）无菌水：一组两瓶ml纯酒精＋ml水ml95%酒精＋ml水752578.921.15.植物生长调节剂的

7、配制激素的使用比较灵活，要根据培养的植物种类和目的而定。常用的激素如生长素和细胞分裂素配制成母液使用起来方便、准确。一般激素母液的浓度为0.2－20mg/ml。配制前需先用相应的少量有机溶剂进行溶解，然后再定容。贴好标签，写明配制激素的浓度，存放于冰箱中。表5激素母液相应的有机溶剂激素名称有机溶剂2,4—D95％酒精萘乙酸（NAA）95％酒精或1NNaOH吲哚丁酸（IBA）95％酒精或1NNaOH吲哚乙酸（IAA）95％酒精或1NNaOH6-BA1NHCl或1NNaOH激动素（KT）1NHCl或1NNaOH玉米素（ZT）95％

8、酒精赤霉素（GA3）95％酒精实验二培养基制备与灭菌实验方法及步骤1.培养基配制每组配制培养基1000ml。(1)每组取烧杯一只，分别量取大量元素、微量元素、铁盐、有机物质成分置于烧杯中备用（注意：移液管不能混用）。(2)每组取1000ml白瓷缸一只，用量筒取