Ang-2及其受体Tie-2在骨肉瘤中的表达.pdf

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1、1246河北医药2017年4月第39卷第8期HebeiMedicalJournal，2017，Vol39AprNo.8doi:10．3969/j．issn．1002－7386．2017．08．037·论著·Ang-2及其受体Tie-2在骨肉瘤中的表达赵小明薛新宏曹晓强张会文李军苏立新王振旺【摘要】目的研究Ang-2及其受体Tie-2在骨肉瘤的表达情况。方法选取唐山市第二医院2009年1月至2011年1月手术切除的69例骨肉瘤标本做为病例组。另取12例正常骨组织标本做对照组。采用ＲT-PCＲ法检测Ang-2及其受体Tie-2的表达水平。结果骨肉瘤组Ang-2表达水

2、平显著高于对照组(P＜0．05);骨肉瘤组Ang-2mＲNA表达与Tie-2mＲNA表达正相关(r=0．447，P＜0．01)。结论Ang-2及其受体Tie-2参与了骨肉瘤的血管生成及调控，在骨肉瘤的发展中起着重要的作用。【关键词】骨肉瘤;血管生成素-2;血管生成素-2受体【中图分类号】Ｒ738．3【文献标识码】A【文章编号】1002－7386(2017)08－1246－02骨肉瘤发病率居恶性骨肿瘤首位，出现血运转移需要从侧方加入，使细胞浸没在消化液中约1min左较早。在很多人类恶性肿瘤的组织、体液、血液中发现右;翻转培养瓶观察5～10min，细胞面如果出现了布

3、Ang2表达水平均上调，与恶性肿瘤的血管密度呈正相纹孔状现象，则倒出消化液，加入一些新配制的细胞培［1］关。本研究对69例骨肉瘤患者、12例对照组和骨养液，用吸管小心吹打数次，使细胞均匀分散开，按1∶肉瘤细胞株MG63的表达情况，研究Ang-2和其受体3分配传代培养。Tie-2在骨肉瘤血管生成中的作用，以期为骨肉瘤发病1．2．2ＲNA提取、ＲT-PCＲ及免疫蛋白印迹分析:机制研究、患者预后预测提供理论依据。ＲNA提取按Invitrogen公司的说明书利用Trizol进行1资料与方法ＲNA的提取，逆转录合成cDNA，然后应用PCＲ扩增1．1一般资料病例采集唐山市第

4、二医院2009年1及检测，Westernblot法做免疫蛋白印迹分析月至2011年1月临床手术切除的69例骨肉瘤标本1．3统计学分析应用SPSS11．5统计软件，计数资2(OS组)。另取同期正常骨组织标本12例做对照(对料的检验采用χ检验，计量资料采用t检验，P＜照组)。Ang-2及其受体Tie-2的表达水平采用ＲT-0．05为差异有统计学意义。PCＲ和Westernblot法检，;分析OS患者、正常对照组2结果以及MG63细胞株中Ang-2表达与Tie-2的相关性。2．1Ang-2mＲNA的表达人骨肉瘤细胞系MG63高1．2实验方法表达Ang-2mＲNA(0．

5、37±0．05)。骨肉瘤患者中Ang-1．2．1细胞复苏及培养:从液氮罐中取出安瓿并尽快2阳性率为81．2%，对照组阳性率为16．7%，两组解冻，放入盛有37℃水的搪瓷罐中约2～3min;取出Ang-2阳性率差异具有统计学意义(P＜0．05);骨肉安瓿于操作台用吸管吸出细胞悬液，移入离心管中。瘤组Ang-2mＲNA表达水平明显高于对照组(0．35±小心吹打使细胞悬浮，并观察细胞培养情况;采用低速0．12vs0．05±0．02，P＜0．05)。见表1。离心处理，再重复用培养液漂洗、离心，最后置37℃温2．2Ang-2蛋白的表达人骨肉瘤细胞系MG63中箱培养，第2天

6、更换1次培养液，再继续观察培养。从Ang-2蛋白显示高表达;对照组未检测到表达;骨肉瘤培养基选取一瓶生长良好的MG63细胞，进入传代培患者中，Ang-2蛋白的阳性率和表达量明显高于对照养。先用Hank’s液洗1次;0．25%胰蛋白酶液消化液组(P＜0．01)。见表1。表1Ang-2在骨肉瘤患者和对照组表达情况组别Ang-2mＲNA检测结果［例数(%)］Ang-2/β-actin光密度比值(mＲNA)Ang-2蛋白检测结果［例数(%)］Ang-2/β-actin光密度比值(蛋白)对照组(n=12)2(16．7)0．05±0．0200骨肉瘤组(n=69)56(81．

7、2)*0．35±0．12*49(71)*0．19±0．04*注:与对照组比较，*P＜0．052．3骨肉瘤中Ang-2与Tie-2表达的关系在56例Ang-2mＲNA阳性标本中，有49例Tie-2mＲNA表达作者单位:063000河北省唐山市第二医院(赵小明、曹晓强、张会文、李军、苏立新、王振旺);华北理工大学附属医院(薛新宏)阳性;在13例Ang-2阴性标本中，有7例Tie-2mＲNA通讯作者:薛新宏，063000华北理工大学附属医院;表达阴性，对所得数据进行相关分析证实:Ang-2、Tie-2E-mail:xxhzxm129@sohu．com河北医药2017年

8、4月第39卷第8期Heb