云南省马铃薯青枯病抗性鉴定技术规程2018征求意见稿.doc

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1、云南省马铃薯青枯病抗性鉴定技术规程2018征求意见稿　　ICS65.020B16中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局备案号DB53/TXXXXX—2018马铃薯青枯病抗性鉴定技术规程2018-XX-XX发布2018-XX-XX实施云南省质量技术监督局发布DB53/TXXXXX—2018I前言本标准按照GB/T1.1－xx《标准化工作导则第1部分标准的结构和编写》给出的规则编写。　　本标准由云南省农业科学院提出。　　本标准由云南省农业标准化技术委员会(YNTC07)归口。　　本标准起草单位云南省农业科学院经济作物研究所，中国农业科学院植物保护研究所。

2、　　本标准主要起草人潘哲超、徐进、隋启君、冯洁、王颖、卢丽丽、杨琼芬、李先平、白建明、包丽仙。　　.DB53/TXXXXX—20181马铃薯青枯病抗性鉴定技术规程1范围本标准规定了马铃薯青枯病抗性鉴定的鉴定方法、分级标准和抗性评价等。　　本标准适用于马铃薯青枯病的抗性鉴定。　　2术语和定义下列术语和定义适用于本文本。　　2.1马铃薯青枯病由茄科雷尔氏菌（Ralstoniasolanacearum(Smith)Yabuuchietal.，简称青枯菌）引起的马铃薯细菌性病害。　　马铃薯青枯病的发病症状见附录A.1。　　2.2接种体指用于人工接种鉴定的病原

3、体,本标准特指马铃薯青枯菌3号小种菌株（RalstoniasolanacearumphylotypeII/race3/biovar2）。　　青枯菌的分类及生物学特性见附录A.2。　　2.3菌落形成单位指在琼脂平板上经过一定温度和时间培养后形成的菌落个数，是测量活菌菌落数量的单位，简称CFU（Colony-FormingUnits）。　　青枯菌典型菌落形态见附录A.3。　　3仪器及用具仪器和用具主要包括超净工作台、电子天平、恒温培养箱、人工气候箱、冰箱、高压灭菌锅、恒温摇床、微量可调进样器、烧杯、量筒、培养皿、接种针、三角瓶。　　4试剂试剂为牛肉浸膏、

4、葡萄糖、多聚蛋白胨、酵母粉、琼脂粉、蒸馏水、氢氧化钠、无菌去离子水、红四氮唑（2,3,5-triphenyltetrazoliumchloride，C19H15ClN4）、75%酒精。　　5鉴定方法5.1培养基制备DB53/TXXXXX—201825.1.1NA培养基分别称取牛肉浸膏3.0g、葡萄糖10.0g、多聚蛋白胨5.0g、酵母粉0.5g、琼脂粉15.0g置于1000mL容量的烧杯中，加入500mL蒸馏水，充分搅拌，混合均匀后加蒸馏水定容至1000mL，以1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.0，分装于三角瓶中，高压灭菌锅中121?C灭菌20分

5、钟后备用。　　5.1.2红四氮唑(TZC)培养基称取1.0g红四氮唑（C19H15ClN4）溶于100ml蒸馏水配制成1%红四氮唑溶液，高压灭菌7分钟～8分钟，避光4?C保存,再将100mL的NA培养基中加入0.5mL浓度1%的红四氮唑溶液即制备成红四氮唑(TZC)培养基。　　5.2接种体的制备5.2.1青枯菌系选择以马铃薯青枯病菌3号小种菌株作为接种体。　　5.2.2接种体的制备接种体按以下方法制备a)将室温下保存于灭菌去离子水中的青枯菌株在TZC平板上划线培养，30?C条件下培养48小时。　　b)挑取典型菌落转移至NA培养平板或斜面上，30?C培

6、养48小时。　　c)利用紫外分光光度计，设定波长为600nm，挑取菌脓用灭菌水稀释成浓度为3?108CFU/mL（OD600值0.3）的菌悬液，作为接种体备用。　　5.3供试植物材料供试植物材料按以下要求准备a)以马铃薯品种“米拉”为感病对照,选择健康种薯或组培苗作为繁殖材料。　　b)待鉴定马铃薯统一种植，统一管理，供试植株生长正常、旺盛、整齐，且无其它病虫害干扰。　　C)每份鉴定材料种植10盆（1株/盆），不少于3次重复。　　d)在植株高度为15cm～20cm时接种为宜。　　5.4基质试验用珍珠岩、腐殖土、耕土以及各种器具需进行消毒处理，基质用珍珠

7、岩、腐殖土、耕土按1:1:2比例配制。　　5.5接种方法按以下方法接种a)采用伤根土壤浇菌液接种法。　　b)在离供试马铃薯植株茎基一侧5cm处，用利刀或利铲插入土中5cm～15cm，以切伤部分侧根，然后从土表切缝处浇入新鲜配置的接种体，并随即较轻压合切缝。　　c)接种终浓度为3?107CFU/g干土。　　5.6温湿度要求DB53/TXXXXX—20183接种后放入人工气候箱或培养间，温度26?C～28?C，空气相对湿度应为70%以上，土壤湿度应为土壤最大持水量的60%左右。　　6分级标准分级标准见表1表1马铃薯青枯病发病分级标准分级标准症状1级无症状

8、；2级1个叶片或小叶萎蔫；3级2个～3个叶片萎蔫；4级4个以上叶片萎蔫；5级全部叶片萎蔫或植株死亡。　　7抗