土壤微生物数量测定方法整理10页

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1、土壤微生物的分离鉴定及数量测定方法土壤微生物的分离鉴定及数量测定（一）培养基的制备Ⅰ测定微生物总量培养基：1.细菌培养基（牛肉膏蛋白胨琼脂培养基）牛肉膏Beefextract5.0g蛋白胨Peptone10.0gNaCI5.0g蒸馏水H201000m1琼脂15～20gPH7.2~7.4制备步骤：⑴在100mL小烧杯中称取牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，加50mL蒸馏水，置电炉搅拌加热至牛肉膏，蛋白胨完全溶解.⑵向小铝锅中加入500mL蒸馏水，将溶解的牛肉膏，蛋白胨倒入铝锅中并用自来水洗2～3次.加入5.0gNaC1，在电炉上边

2、加热边搅拌.⑶加入洗净的琼脂条，继续搅拌，加热至琼脂完全熔化，补足水量至1000mL.⑷用NaOH或HC1调至pH7.0.用酸度计或用玻棒沾少许液体用精密pH试纸测定其pH值，并用10％NaOH调至所需pH值，必要时用滤纸或脱脂棉过滤。一般比要求的pH高出0.2，因为高压蒸汽灭菌后，pH常降低。⑸根据不同需要，可将配好的培养基分装入配有棉塞的试管或三角瓶内。注意分装时避免培养基挂在瓶口或管口上引起杂菌污染。如液体培养基，应装试管高度的1/4左右；固体培养基装试管高度的1/5左右；装入三角瓶的量以三角瓶容量的一半为限。，塞好棉塞，

3、装入小铁丝筐，然后用旧报纸将棉塞部分包好.标签表明培养基的名称、配制日期等。⑹高压蒸汽灭菌，用0.1Mpa（15lb/in2）121℃灭菌（15-20）30min.2.放线菌培养基（改良高氏1号琼脂培养基）可溶性淀粉20gKNO31gK2HPO40.5gMgSO4•7H2O0.5gNaCl0.5g原0.05gFeSO4•7H2O0.01gpH7.2-7.4制备步骤：（1）计算根据配方计算各种药品所需要的量，然后再分别称量。（2）称量准确称量各种成分。（3）溶化配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入少许沸水中，在火上加热，边搅拌

4、边依次逐一溶化其他成分，溶化后，补足水分到1000ml，调PH（可不调）。（4）分装、包扎、灭菌。土壤微生物的分离鉴定及数量测定方法注：各成分按配方顺序依次溶解，对于微量成分，可预先配成高浓度的溶液，方便配置时量的控制。配制时，先用少量冷水，将淀粉调成糊状，倒入少于所需水量的沸水中，在火上加热，边搅拌边依次逐一溶化其他成分，溶化后，补足水分到1000ml，调pH。另：倒平板之前，在溶化的培养基中加重铬酸钾溶液，每300mL培养基加3%重铬酸钾1mL(l00ppm)。3.真菌培养基（马丁（Martin）-孟加拉红琼脂培养基）葡萄糖

5、10.0gMgSO4.7H2O0.5g蛋白胨5.0g孟加拉红33.4mg（或者每升加1%溶液3.3mL）K2HPO41g蒸馏水H201000m1PH自然(4-5)制备步骤：（1）计算根据配方计算各种药品所需要的量，然后再分别称量。（2）称量和熔化按培养基配方，准确称取各成分，并将各成分依次溶化在少于所需要的水量中待各成分完全溶化后，边加边搅拌,以防糊底,补足水分到所需体积。再将孟加拉红配成1%的溶液，在1000ml培养液中加入1%的孟加拉红溶液3.3ml，混匀后，加入琼脂加热溶化。(3)分装、加塞、包扎、灭菌。(4)链霉素的加入

6、由于链霉素受热易分解，所以临用时将培养基溶化后待温度降低至45摄氏度左右时才能加入。注：⑴灭菌前加卡那霉素20μg/ml，或者倒平板之前加链霉素。⑵倒平板之前加乳酸，每100mL培养基加0.lmL。Ⅱ测定功能菌所用培养基：1.亚硝酸细菌培养基（改良的斯蒂芬逊（Stephenson）培养基A）(NH4)2SO42.0gNaH2PO40.25gMnSO4·4H2O0.01gMgSO4·7H2O0.03gK2HPO40.75gCaCO35.0g蒸馏水1000mlPH7.2注：CaCO3最后加，不需要溶解，直接调PH，培养基中有这个成分

7、是为了缓冲pH。因为硝化细菌的生长会产生酸化效应，使得氢离子过剩，到了一定程度硝化作用将无法继续，所以要碱性物质平衡酸碱。下同。2.硝酸细菌培养基（改良的斯蒂芬逊（Stephenson）培养基B）NaH2PO40.25gK2HPO40.75gMgSO4·7H2O0.03gMnSO4·4H2O0.01g土壤微生物的分离鉴定及数量测定方法CaCO31.0gNa2CO31.0gNaNO21.0g蒸馏水1000mlPH7.23.反硝化细菌培养基柠檬酸钠5.0gKNO32.0gKH2PO41.0g,K2HPO41.0gMgSO4·7H2O

8、0.2g蒸馏水1000mlpH值7.2~7.54.好气性自生固氮菌培养基（改良阿须贝(Ashby)无氮培养基）苯甲酸钠1.5gK2HPO40.2gMgSO4·7H2O0.2gNaCl0.2gCaSO4·2H2O0.1gPH7.4—7.6注：在培养基分装入试管时，