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1、第42讲微生物的分离和培养考点一微生物的实验室培养考点二微生物的分离与计数总纲目录高考再现考点一 微生物的实验室培养1.培养基(1)概念:人们按照微生物对①营养物质的不同需求,配置出供其②生长、繁殖的营养基质。(2)成分:一般都含有③水、碳源、氮源、无机盐,还要满足不同微生物对④pH、特殊营养物质以及⑤氧气的需求。(3)分类:a.按物理性质分:⑥液体培养基、⑦半固体培养基、⑧固体培养基。b.按化学成分分:天然培养基、合成培养基。c.按功能分:⑨选择培养基、⑩鉴别培养基。2.无菌技术(1)消毒和灭菌的比较使用方法结果常用方法消毒温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部
2、分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法等灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子)灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌(即湿热灭菌)(2)适用对象3.大肠杆菌的纯化培养(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基步骤:计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。(2)纯化大肠杆菌常用方法:(1)平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。(2)稀释涂布平板法:将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,进行培养。4.菌种的保存方法1.对
3、于频繁使用的菌种,可以采用临时保藏的方法。2.对于需要长期保存的菌种,可以采用甘油管藏的方法。1.为了防止污染,接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落。(✕)2.配制培养基时,除满足营养需求外,还应考虑pH、O2及特殊营养物质的需求。(√)3.倒平板时,应将打开的皿盖放到一边,以免培养基溅到皿盖上。(✕)4.对异养微生物来说,含C、H、O、N的有机化合物既是碳源,又是氮源、能源。(√)5.消毒的原则是既杀死材料表面的微生物,又减少消毒剂对细胞的伤害。(√)6.用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时都需要使用接种针进行接种。(✕)如图是采用纯化微生物的两种接种方法接种后
4、培养的效果图,请分析:(1)获得A效果的接种方法是,获得B效果的接种方法是。(2)一同学在纯化土壤中的细菌时,发现培养基上的菌落连成了一片,最可能的原因是。(3)接种操作要在火焰附近进行的原因是。答案(1)稀释涂布平板法 平板划线法 (2)菌液浓度过高(或划线时在划下一区域前未将接种环灼烧灭菌) (3)火焰附近存在着无菌区域1.牛肉膏蛋白胨培养基的配制项目要求操作计算根据配方比例计算配制100mL的培养基所需各种成分的用量称量准确地称取①放在称量纸上称量②动作迅速,及时盖瓶盖溶化防止琼脂糊底①连同称量纸一起加水、加热②待牛肉膏溶化取出称量纸③添加蛋白胨、氯化钠、琼脂④玻
5、璃棒不停地搅拌⑤补加蒸馏水至100mL项目要求操作灭菌杀死芽孢和孢子①培养基高压蒸汽灭菌②培养皿干热灭菌倒平板待培养基冷却至50℃左右①在酒精灯火焰旁操作②锥形瓶的瓶口要迅速通过火焰③左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙,右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿,左手立即盖上培养皿的皿盖④待培养基凝固,将平板倒置,使皿盖在下,皿底在上注意:(1)熔化后需先调节pH,再分装后灭菌。(2)检查培养基制作是否合格:将未接种的培养基在恒温箱中保温1-2天,若无菌落生长,说明配置成功,否则需要重新配置。2.平板划线法操作注意事项①第一次划线及每次划线之前都需灼烧接种环,划线操作结束时,仍需
6、灼烧接种环。每次灼烧目的如表所示:第一次划线前灼烧每次划线之前灼烧划线结束时灼烧目的避免接种环上可能存在的微生物污染培养基杀死上次划线结束后,接种环上残留的菌种,使每次划线的菌种直接来源于上次划线的末端杀死接种环上残留的菌种,避免细菌污染环境和感染操作者②接种环灼烧后,要冷却后才能接触菌种,以免温度太高杀死菌种。③划线时最后一区域不要与第一区域相连。④划线时用力要大小适当,防止用力过大将培养基划破。3.稀释涂布平板法操作及注意事项①系列稀释操作(如图1)图1②涂布平板操作(如图2)图2③注意事项a.稀释操作时,每支试管及其中9mL水、移液管均需灭菌;操作时,试管口和移液
7、管应在离火焰l~2cm处;移液管头不要接触任何物体。b.涂布平板时,涂布器用体积分数为70%的酒精消毒,取出时,多余酒精在烧杯中滴尽,后将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃。不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中,以免点燃其中的酒精。酒精灯与培养皿距离要合适。移液管头不要接触任何物品。1.(2019江苏盐城模拟)某化工厂的污水池中含有一种有害的难以降解的有机化合物A,研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素等配制的培养基,成功筛选到能高效降解化合物A的细菌(目的菌),实验的主要步骤如图所示,下列有关叙述错误的是()考向一 培养基及
