荧光定量PCR试剂盒说明书.pdf

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1、CatalogNo.RT0411-01产品简介2×SYBRGreenMix（WithROX）是使用染料法（SYBRGreenⅠ）进行实时荧光定量PCR扩增反应的预混体系，包括HotstartTaqDNAPolymerase，Buffer，dNTPs，SYBRGreen2+I荧光染料、Mg和ROX校正染料。本品含有经化学修饰的全新高效的热启动酶HotstartTaqDNAPolymerase，在常温下没有聚合酶活性，有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活须在95℃下孵育10分钟。主要用于基因组

2、DNA靶序列和RNA反转录后cDNA靶序列的检测。本品所含的荧光染料SYBRGreenI可以与所有的双链DNA结合，使该产品可用于不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。所含的ROX染料可校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差,适用于以ROX作为校正染料的所有荧光定量PCR仪。产品包装2×SYBRGreenCat.No.KitSizeRNase-FreeWaterMix（WithROX）RT0411-0150T（50μl体系）1.25mL1.25mLRT0411-02100T（50μl体系）2.5mL2.5mLRT0411-032

3、00T（50μl体系）5.0mL5.0mLRT0411-0020T（50μl体系）0.5mL0.5mL保存条件-20℃避光保存，尽量避免尽量避免反复冻融。注意事项1使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。2本产品中含有SYBRGreenI荧光染料和ROX染料，保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。3避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。如果在短期内需要频繁使用，可在2-8℃保存。使用方法以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。1.PC

4、R反应体系：试剂50μl反应体系终浓度2×SYBRMixture（WithROX）25μl1×ForwardPrimer，10µM1µl0.2μM(推荐)ReversePrimer，10µM1μl0.2μM(推荐)TemplateDNA2μlRNase-FreeWaterupto50μl注：引物浓度以0.1-1.0μM终浓度作为设定范围的参考。扩增效率不高时，提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度;DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ngcDNA为参照。2.PCR反应程序：两步法PCR：步骤温度时间预变性95

5、℃10min变性95℃15s35-40个循环退火/延伸60℃1min融解曲线分析95℃15s60℃1min95℃15s60℃15s注意：1）本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、10min条件下实现酶的活化。2）建议采用两步法PCR反应程序，若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以56℃-64℃的范围作为设定参考。3）融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定，本说明是以ABI7500荧光定量PCR仪为参照设定。