[精品]细菌学诊断新技术

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1、1细菌学诊断新技术随着现代科学技术的不断发展特别是免疫学、生物化学、分子生物学的不断发展新的细菌诊断技术和方法已广泛用于食品微生物的鉴别。传统的细菌分离、培养及生化反应已远远不能满足对各种病原微生物的诊断以及流行病学的研究。近年來国内外学者不断努力已创建不少快速、简便、特异、敏感、低耗且适用的细菌学诊断方法尤其是DNA探针和多聚酶链反应技术的发展和应用明显提高了细菌的诊断水平。一、快速酶触反应及细菌代谢产物的检测快速酶触反应是根据细菌在其生长繁殖过程中可合成和释放某些特异性的酶按酶的特性选用相应的底物和指示剂将他们配制在相关的培养基中。根据细菌反应后出现的明显

2、的颜色变化确定待分离的可疑菌株反应的测定结果有助于细菌的快速诊断。这种技术将传统的细菌分离与生化反应有机的结合起来并使得检测结果直观正成为今后微生物检测发展的一个主要发展方向。Rosa等将样木直接接种于Granda培养基经18小时培养后B群链球菌呈红色菌落且可抑制其他菌的生长。Delise等新合成一种耗基卩引味■卩・D葡萄糖甘酸IBDG在卩・D葡萄糖葫酶的作用下生成不溶性的蓝将-•定量的IBDG加入到麦康盖培养基琼脂中制成MAC-IBDG平板35°C培养18小时出现深蓝色菌落者为人肠埃希氏阳性菌株。其色彩独特且靛蓝不易扩散易与乳糖发酵菌株区别。二、免疫学方法检

3、测细菌抗原或抗体的技术在细菌诊断中利用免疫学的各种方法日益受到人们的极大关注从而简化了病原微生物的鉴定手续。1抗血清凝集技术早在1933年Lancefield就成功地用多价血清对链球菌进行了血清分型。随着抗体制备技术的进一步完善尤其是单克隆抗体的制备明显提高了细菌凝集实验的特异性今天广泛用于细菌的分型和鉴定如沙门氏菌、霍乱弧菌等。2乳胶凝集实验将特异性的抗体包被在乳胶颗粒上通过抗体与相应的细菌抗原结合产生肉眼可见的凝集反应。通常此法需获得细菌纯培养物再将培养物与致敏乳胶反应。业已用于鉴定人肠杆菌O157H7°3荧光抗体检测技术用于快速检测细菌的荧光抗体技术主耍

4、有直接法和间接法。直接法是在检测样品上直接滴加已知特异性荧光标记的抗血清经洗涤后在荧光显微镜下观察结果。间接法是在检样上滴加已知的细菌特异性抗体待作用后经洗涤再加入荧光标记的第二抗体。如研制成的抗沙门氏菌荧光抗体用于750份食胡样胡的检测结果表明与常规培养法符合率基木一-致。4协同凝集试验COA业已证实葡萄球菌A蛋白SPA具有与人及各种哺乳动物IgG的Fc段结合的能力而不彫响抗体Fab段的活性。近年来国内外学者采用抗体致敏的SPA检测细菌即协同凝集试验。如Rahman等用协同凝集试验鉴定霍乱弧菌01群的初代分离物做快速筛选比常规法节省时间对204份材料用两种方

5、法比较表明协同凝集试验具有较高的特异性和敏感性。5酶联免疫测试技术酶联免疫技术的应用大大提高了检测的敏感性和特界性现已广泛地应用在病原微牛•物的检验。应用酶联免疫技术制造的mini-Vidas全H动免疫分析仪是用荧光分析技术通过固相吸附器用已知抗体來捕捉日标生物体然后以带荧光的酶联抗体再次结合经充分冲洗2通过激发光源检测即能自动读出发光的阳性标木其优点是检测灵敏度高速度快可以在48小时的时间内快速鉴定沙门氏菌、大肠杆菌O157H7、单核李斯特菌空肠弯曲杆菌和葡萄球菌肠毒素等。三、分子生物学技术在检测食源性病原微牛物中的应用随着分子微牛物牛物学和分子化学的飞速发

6、展对病原微牛物的鉴定已不再局限于对它的外部形态结构及牛理特性等一般检验上而是从分子牛物学水平上研究生物人分子特别是核酸结构及其组成部分。在此基础上建立的众多检测技术中核酸探针Nuclearacidprobe和聚合酶链反应Polymerasechainreaction以其敏感、特异、简便、快速的特点成为世人瞩目的生物技术革命的新产物业已逐步应用于食源性病原菌的检测。1核酸探针将已知核甘酸序列DNA片段用同位素或其他方法标记加入已变性的被检DNA样品中在一定条件下即可与该样品中有同源序列的DNA区段形成杂交双链从而达到鉴定样品中DNA的FI的这种能认识到特异性核昔

7、酸序列有标记的单链DNA分了核酸探针或基因探针。2核酸探针的类型根据核酸探针中核昔酸成分的不同可将其分成DNA探针或RNA探针一般人多选用DNA探针根据选用基因的不同分成两种一种探针能同微生物中全部DNA分子中的一部分发牛反应它对某些菌属、菌种、菌株有特异性另一种探针只能限制性同微牛物屮某一基因组DNA发生杂交反应如编码致病性的基因组它对某种微生物中的一种菌株或仅对微生物中某一菌属有特异性。这类探针检测的基因相当保守包拾人部分rRNA因为他既可能在一种微生物中出现又可代表一群微生物。如应用rRNA探针检测作为筛选食品污染程度的指示菌E.Coli.选择探针的原则

8、是只能同检测的细菌发生杂交反应而不受非