全国结核病细菌学诊断培训

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1、2006年10月全国结核病细菌学诊断标准培训结核病流行和防治策略端木宏谨北京结核病胸部肿瘤研究所与结核病细菌学实验室诊断相关的结核分枝杆菌生物学性状要略潘毓萱结核病实验室工作质量保证姜广路国家结核病参比实验室生物安全柜的使用王秋娣中国疾病预防控制中心诊断试验研究与评价史红中华检验医学杂志编辑部结核菌涂片、培养的标准化操作刘宇红国家结核病参比实验室消毒和灭菌胡继红卫生部临床检验中心结核病实验室诊断进展赵雁林国家结核病参比实验室我国结核病防治形势与任务肖东楼卫生部疾病预防控制局全球结核病负担俄罗斯1%印度尼西亚10%孟加拉4%巴基斯坦4%尼日利亚3%菲律宾s3%南非2%中国15%印度3

2、0%其他国家28%我国多达5.5亿的人口感染过结核菌2004年WHO估算活动性肺结核病1460万人涂阳610万人新发结核病890万人新涂阳390万人死于结核病170万人（我国：37万，居法定传染病之首）结核病控制三大目标：1.近期目标：到05年，病人发现率达70%，治愈率达85%，DOTS覆盖率达100%2.中期目标：到2010年，结核病患病率和死亡率在1990年的基础上各下降50%3.长期目标：到2050年，基本消灭结核病，发病率<1/1百万病人减少百分比=发现率×治疗覆盖率×完成治疗率×治愈率0.4×0.9×0.9×0.9＝0.5×0.9×0.9×0.9＝0.6×0.9×0.9

3、×0.9＝0.7×0.9×0.9×0.9＝0.290.360.440.510.3×0.9×0.9×0.9＝0.22现代结核病控制策略政府承诺开展以痰检为主的病人发现工作应用标准短程化疗并实施督导管理建立正规的药物供应系统建立监测系统结核病控制是由政府提供给大众的卫生服务－NTP（nationalTBcontrolprogram）卫生部国家CDC国家参比实验室省卫生厅地市卫生厅县卫生局省CDC（结防所）地市CDC（结防所）县结核病防治机构省参比实验室地市实验室县结核病实验室NTP我国结核病实验室工作网络的组织管理（疾控）NTP中主要的实验室工作涂片镜检简单、快速、最具成本/效益培养比

4、涂片更敏感、特异可以获得培养物药物敏感性试验及鉴定用药参考流行病学评价抗酸性的基本特性：1.属特异性富脂质网状胞壁结构α烷基β羟基脂肪酸分枝杆菌分支菌酸碳链28~40棒状杆菌分支菌酸碳链40~60诺卡氏菌分支菌酸碳链60~902.变异性培养条件：丙三醇糖苷组织内环境不同菌状态3.抗酸性是分枝杆菌属特异性不能作为分枝杆菌种水平鉴定的生物学指标涂片染色镜检相关的生物学性状传统萋尼氏染色法（1882）TamThiamHok法（1962）1.碱性复红5克1.碱性复红20克酚25克酚40克乙醇95%50毫升乙醇95%100毫升蒸馏水500毫升蒸馏水500毫升热染3分钟冷染3分钟2.乙醇95%

5、970毫升2.亚甲兰5克浓盐酸30毫升乙醇95%150毫升蒸馏水250毫升硫酸96%100毫升3.孔雀绿2.5克亚甲兰2.5克苦味酸3.5克蒸馏水500毫升分枝杆菌的形态多样性：Bergy’sMannualofSystematicBacteriology典型描述：杆状，0.3-0.6×1-4μm,直或稍些弯曲，单个，偶呈串状，染色均匀或不规则，常见异染质，有分枝样生长或集簇倾向形态多样性：陈旧培养物淋巴结，干酪组织内呈生理多样性和形态多样性杆菌相（型）：抗酸性+++短杆状++-+++丝状+/±球菌相（型）：诺卡氏菌胞壁缺陷型+/±/-李斯特菌胞壁缺陷型±/-颗粒相（型）：-滤过相（

6、型）：-细菌学限制：形态多样性和可培养性抗酸性镜检阳性依据分离培养典型杆状+++短杆状+？+球状、丝状+、±-？胞壁缺陷部分缺陷±-？完全缺陷L-型--？颗粒±/---莫赫颗粒---滤过型---菌形态多样性排菌间歇性痰样本中菌分布不均匀性结果：常规涂片染色镜检是以正常杆菌形态为阳性判定标准出现漏检的假阴性影响涂片染色镜检的因素抗酸性的属特异性假阳性抗酸性变异性假阴性形态多样性假阴性均分布不均匀性假阴性低敏感度涂阴培阳结核菌涂片镜检、分离培养标准化操作1、对象结核病可疑者咳嗽、咳痰超过3周咳血或伴有血痰发热或胸痛超过2周胸部X线异常确诊并正在接受治疗的结核病人2、痰标本收集容器：广

7、口、螺旋盖、可密闭、不易泄漏标本性状：干酪痰、血痰、粘液痰、唾液采集时间：即时痰、晨痰、夜间痰3、标本接收和登记检查标本性质，不合格的痰标本可以要求病人重新留取核对申请单和痰盒上的标本信息登记在实验室记录本上4、材料的准备痰盒玻片（一端带有磨砂边）竹（木）签定时器染色池、染色架酒精灯加热棒玻片盒废料缸漏斗（滤纸)镊子染色液镜油、镜头纸5、涂片编号涂抹痰标本自然干燥2cm1cm2verticallines,1cmeach=100fields不得使用火焰加热的方法加