生物、化学-常用试剂配制

《生物、化学-常用试剂配制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、常规试剂配制和测定方法一、溶液的配制1.Mandels营养盐溶液（1000mL）名称重量（g）硫酸铵（(NH4)2SO4）14磷酸二氢钾（KH2PO4）20尿素（H2NCONH2）3硫酸镁（MgSO4·7H2O）3氯化钙（CaCl2·2H2O）4注：用煮沸10min后的蒸馏水配制。2.Mandels微量元素溶液（1000mL）名称重量（g）氯化钴（CoCl2·6H2O）3.7硫酸锌（ZnSO4·7H2O）1.4硫酸锰（MnSO4·H2O）1.6硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）5.0注：用煮沸10min后的蒸馏水配制。3.

2、DNS试剂的配制（1000mL）（1）取：3,5-二硝基水杨酸（C7H4N2O7）7.5g氢氧化钠（NaOH）14.0g充分溶解于1000mL水中（水预先煮沸10min）（2）加入：酒石酸钾钠（C4H4O6KNa·4H2O）216.0g苯酚（在50℃水浴中融化）5.5mL偏重亚硫酸钠（Na2S2O5）6.0g（3）充分溶解后盛于棕色瓶中，放置5天后便可使用，平时盛一小瓶(250mL)使用，要放在冰箱中冷藏。此溶液每月配制一次。注意：倒入瓶中时要尽量装满！！4.考马斯亮蓝G-250的配制（1000mL）称考马斯亮蓝G-25

3、0100mg即0.1g溶于50mL95%乙醇中，加入100mL85%磷酸，用蒸馏水稀释至1000mL，滤纸过滤。最终试剂中含0.01%（w/v）考马斯亮蓝G-250，4.7%（w/v）乙醇，8.5%（w/v）磷酸。5.1.0M柠檬酸缓冲溶液的配制（1000mL）名称分子量Mn重量(g)柠檬酸（C6H8O7·H2O）210210NaOH4074.5准确称取柠檬酸210g，溶于约750mL煮沸（10min）蒸馏水中，待柠檬酸充分溶解后加入氢氧化钠74.5g，完全溶解后将上述溶液转移到1000mL容量瓶中，冷却后将容量瓶定容到

4、1000mL（原始pH4.45）。（检验方法：取1.0M柠檬酸缓冲溶液稀释20倍，测定稀释液的pH值，pH值应为4.8）6.标准糖溶液的配制和标准方程的测定（1）标准糖溶液的配制准确称取2.000g葡萄糖/木糖（葡萄糖/木糖需105℃烘干3h），蒸馏水溶解，全部转移至1L容量瓶内，摇匀，配制成2g/L葡萄糖/木糖溶液。取9个100mL容量瓶、1支20mL刻度吸管，分别吸取2g/L葡萄糖/木糖溶液10mL、20mL、30mL、40mL、50mL、60mL、70mL、80mL、90mL依次加入容量瓶，蒸馏水定容，摇匀。即为0

5、.2g/L、0.4g/L、0.6g/L、0.8g/L、1.0g/L、1.2g/L、1.4g/L、1.6g/L、1.8g/L、2.0g/L葡萄糖/木糖标准溶液。取6个30mL容量瓶、1支20mL刻度吸管，分别吸取2g/L葡萄糖溶液10mL、12mL、14mL、16mL、18mL、20mL依次加入容量瓶，每瓶再加入1.5mL柠檬酸缓冲液，蒸馏水定容，摇匀。即为1.0g、1.2g、1.4g、1.6g、1.8g、2.0g酶解葡萄糖。（2）标准方程的测定：①葡萄糖/木糖标准方程的测定取10支25mL刻度管，10支1mL刻度吸管，分

6、别加入0.2g/L、0.4g/L、0.6g/L、0.8g/L、1.0g/L、1.2g/L、1.4g/L、1.6g/L、1.8g/L、2.0g/L葡萄糖/木糖标准溶液1mL，DNS溶液3mL。100℃煮沸5min，水浴冷却后定容至25mL，摇匀。以蒸馏水作为空白对照，550nm测定吸光度A。以A为纵坐标，C为横坐标，制定标准曲线。（7230型分光光度计输出方程为：A=MC+N，723型分光光度计输出方程为：C=KA+B）②酶解木糖标准方程测定（测定木聚糖酶活力）取6支25mL刻度管，6支2mL刻度吸管，分别加入1.0g、1

7、.2g、1.4g、1.6g、1.8g、2.0g酶解木糖标准溶液1.5mL，DNS溶液3mL，100℃煮沸5min，水浴冷却后定容至25mL，摇匀。以蒸馏水作为空白对照，550nm测定吸光度A。以A为纵坐标，C为横坐标，制定标准曲线。（7230型分光光度计输出方程为：A=MC+N，723型分光光度计输出方程为：C=KA+B）③酶解葡萄糖标准方程测定（测定滤纸酶活力、CMC酶活力）取6支小试管，6支2mL刻度吸管，分别加入1.0g、1.2g、1.4g、1.6g、1.8g、2.0g酶解葡萄糖标准溶液1.5mL，DNS溶液3mL

8、，100℃煮沸5min，水浴冷却后，量筒定容至50mL（定容至25mL，测定CMC酶活力），摇匀。以蒸馏水作为空白对照，550nm测定吸光度A。以A为纵坐标，C为横坐标，制定标准曲线。（7230型分光光度计输出方程为：A=MC+N，723型分光光度计输出方程为：C=KA+B）7.柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液的配制pH0.