重庆市腹泻仔猪大肠杆菌分离鉴定及药敏试验研究

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1、重庆市腹泻仔猪大肠杆菌分离鉴定及药敏试验研究张素辉，曹国文，付利芝,徐登峰，周淑兰,王孝友(重庆市畜牧科学院荣昌402460)摘要：从重庆多个规模猪场采集34份腹泻仔猪粪便样品进行细菌的分离，通过形态学检查、生化鉴定分离到的32株犬肠杆菌，并对分离的人肠杆菌菌株进行药物敏感试验，结果显示,氨节青/舒巴坦、菌必治、先锋必、先锋必索等为其敏感药物。关键词：腹泻仔猪；大肠杆菌；分离；鉴定；药敏试验随着养猪业规模化、集约化发展，仔猪细菌性腹泻疾病发病率越来越高，危害也越来越严重。据资料统计，我国仔猪死亡率一般波动在15-25%之间，

2、2周龄以内死亡率为26%,2-4周龄的死亡率为16%,断奶前后因腹泻死亡占总死亡的49.I1%1'1,其中70%的死亡被认为是大肠杆菌的作用［21。仔猎大肠杆菌病是山致病性大肠杆菌引起的-种急性肠道传染病，常见的有仔猪黄痢、仔猪白痢。该病在我国许多地区的猪场都有发生，是危害仔猪的重要传染病Z-o随着集约化养猪业的发展，致病性大肠杆菌造成的损失H益明显，已经引起了广泛重视。笔者对重庆肚部分猪场腹泻仔猪进行调查，从流行病学及临床症状分析疑为大肠杆菌引起。从所分离菌株在麦康凯琼脂培养基上长出红色菌落、显微镜镜检以及所做的生化试验结

3、果证明所分离出的细菌为大肠杆菌。日前，防治仔猪大肠杆菌感染杵•腹泻的较有效『段仍是应用抗牛素，但动物长期服用大量滥用抗菌药物，易破坏肠道正常菌•群，增加感染性，造成反复感染和继发感染，同时易造成细菌耐药性的增加，因此，针对临床分离的人肠杆菌病原菌进行药敏试验，而指导临床用药具有重要意义。1.材料：病料：腹泻仔猪粪便，采自重庆多个规模化猪场。培养基及试剂：麦康凯培养基、普通琼脂培养基、伊红美蓝培养基、普通营养肉汤培养基、肠杆菌科细菌微量生化鉴定管，购自杭州微生物试剂有限公司。一药敏纸片：头抱卩坐I麻、菌必治、先锋必、新霉素、氛

4、派酸、丙氛派酸、磺胺甲基异嗯醴、复方新诺明、头葩氨陸肪、恩诺沙星、阿奇每索、阿莫西林等12种抗生索，购自杭州微生物试剂有限公司。作者简介：张素辉(1980-),女，硕士，实习研究员。从事动物微生态制剂与新曽纱的研究。2.方法:2.1大肠杆菌的分离培养川火菌普通肉汤洗涤沾有腹泻仔猪粪便的火菌棉拭子，接种于麦康凯培养基，37°C培养24h,鼎馭粉红色的单个菌落，分别划线接种于普通培养基、伊红美蓝培养基进行纯培养;取纯培养菌接种于普通琼脂斜面，37°C培养20h,4°C保存备川。2.2分离菌形态观察挑取麦康凯培养基上生长的红色菌落

5、、伊红美蓝平板上的暗黑色带金属光泽的菌落,涂片进行革兰氏染色，光学显微镜镜检观察分离菌株的染色及形态特点。2.3分离菌牛化试验对细菌进行糖发酵试验、甲基红试验、VP试验、眄

6、口朵试验、硫化氢试验、尿素酶试验、枸椽酸盐利川试验。2.4分离菌药敏试验各选取分离自每个猪场的大肠杆菌代表株两株（共10株）进行药物敏感性试验，编号分别为：4586、4591、5677、5679、4667、4671、4518、4526、4571、4656。用灭菌棉拭子蘸取分离菌的肉汤培养物，均匀涂布接种于普通琼脂培养基，待稍干后，用无菌银子将各种药敏纸片

7、分别平贴于培养基表仙37°C培养12・18h后，测定抑菌环的大小。判定标准：抑菌环一育径在15mm以上为高度敏感；10〜15mm为中度敏感；10mm以下为低度敏感，无抑菌环为耐药。3.结果3.1细菌在培养基上菌落及革兰氏染色镜检特征腹泻仔猪粪样接种于麦康凯培养基，于37°C培养24h后形成红色、恻形、光滑、湿润、中央隆起、中等大小的菌落。伊红美蓝培养基37°C培养24h形成圜形、边缘整齐、暗黑色带金属光泽的菌落；普通培养基上37°C培养24h后得到纯培养菌，菌落呈恻形、湿润、降起、半透明的近无色菌落。取单个菌落接种于普通肉汤

8、中可观察到肉汤变混浊，底部有絮状物沉淀。染色镜检特征：革兰氏阴性，两端钝圆的中等大小杆菌。3.2牛化试验结果对所令可疑菌株进行生化试验，各菌株均能发酵匍萄糖、麦芽糖、乳糖、廿露醇、山梨醇产酸，多数能产气，MR试验为阳性，VP试验为阴性，硫化氢试验、尿素酶试验均为阴性,不能利用枸椽酸盐，参见伯杰氏细菌鉴定手册，试验结果与大肠杆菌相应的牛化特性一致,将分离的32株菌判定为人肠杆菌。3.3药敏试验结杲药物敏感性试验结果见表1。表1显示，笔者在重庆市2007年分离的人肠杆菌对菌必治、先锋必、氟派酸、头砲氨噬衍、恩诺沙星等高度敏感；对

9、卡那霉素，新霉素、坏丙沙星中敏,对头他呻唯、阿奇霉索等中度敏感；对新霉素、复方新诺明、阿莫西林不敏感。农112种抗菌索药敏纸片对10株大肠杆菌分离菌的抑菌圈直径（单位:俪）Tablet.Thebacteriostasis-diameteroftheBacteriophage-sliptot