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《氯氰菊酯降解菌DZS―3的分离鉴定及其特性》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、氯氧菊酯降解菌DZS-3的分离鉴定及其特性摘要：以氯氧菊酯为惟一碳源与氮源，从生产氯氤菊酯的农药厂污水曝气处理池的活性污泥样品中，通过富集驯化和划线分离，筛选出一株氯氟菊酯的高效降解菌DZS-3o经气相色谱检测，3d内其对氯氧菊酯的降解率为65.7%0形态学观察，该菌圆形，周边光滑，革兰氏染色鉴定为革兰氏阴性菌。通过16SrDNA序列分析及生理生化特性鉴定，将其初步鉴定为寡养单胞菌属的一种(Stenotrophomonassp.)。关键词：氯氧菊酯降解菌;筛选;鉴定;寡养单胞菌属(Stenotrophomonassp.)中图分类号：X172;Q9
2、3-331文献标识码：A文章编号：0439-8114(2014)23-5708-05DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2014.23.022拟除虫菊酯类(SyntheticPyrethroids)杀虫剂是一类具有优异生物活性、环境相容性较好的农药，它是继有机磷、有机氯和氨基甲酸酯之后发展起来的一类杀虫剂⑴。该类杀虫剂是模拟植物源农药一一天然除虫菊酯合成的一类含有多个苯环结构的化学农药[2,3]o氯氧菊酯是拟除虫菊酯类杀虫剂中的一种，具有高效、广谱、低毒等优点，被广泛应用于果树、蔬菜的病虫防治，但其在环境中有一定的
3、蓄积性，很难在自然条件下快速降解。氯氧菊酯的广泛使用，造成了其在农产品上的大量残留和土壤、河流的污染，给生态环境和人类自身的健康安全带来了极大的威胁。农药残留是影响我国农产品出口的重要屏障，农药残留超标势必给我国的经济造成极大的损失。虽然国内外关于处理拟除虫菊酯类农药残留的方法有很多的报道,但都不能从根本上消除农药残留的问题。如何有效地解决菊酯类农药残留的问题，成为当前人们面临的一大难题。残留在环境中的氯氤菊酯可以通过光降解、化学降解以及微生物的作用被降解。而与化学降解和光降解等方式相比较而言，农药的微生物降解具有安全、高效、费用低、无二次污染等
4、优点，所以，以微牛物降解为基础的牛物修复是一种环境友好型污染物消除技术，也是去除氯氤菊酯残留的一种有效的手段。本研究旨在于分离筛选出新的高效降解氯氧菊酯的菌株，检测其对氯氧菊酯的降解能力，探讨直接用于氯氤菊酯引起的环境污染的微生物修复的可能性。1材料与方法1.1材料1.1.1主要仪器设备自动凝胶成像分析仪，PCR扩增仪,电泳仪，全自动高压蒸汽灭菌锅，恒温摇床，超净工作台，显微镜，生化培养箱，紫外■可见分光光度计(PELambda25),气相色谱仪(Agilent)。1.1.2采集样品从江苏某农药厂曝气池排污口附近土壤采集样品。1.1.3试齐!JK
5、2HPO4、KH2PO4、MgS04、FeS04、NaCI、氯仿、环己烷均为分析纯，琼脂，牛肉浸取物，胰蛋白月东(Tryptone),酵母提取物(Yeastextract),氯氤菊酯原药(纯度94%)(氯氤菊酯原药使用前先用乙醇或正己烷配成高浓度母液，并过滤除菌)。1.1.4扩增16SrDNA引物primer27F：5，AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3';primer1492R：5'GGTTACCTTGTTACGACTT-3z。1.1.5培养基2）基础培养基：MgSO4?7H2O0.5g,K2HPO473H2O1.5g,KH2PO40
6、.5g,FeSO4?7H2O1.0g,去离子水1L。2）增菌富集培养基：蛋口月东2.0g,NaCl1.0g,牛肉膏1.0g,去离子水IL,pH7.0〜7.2。3）LB培养基：NaCl10g,Yeastextract5g,Tryptone10g,去离子水IL,pH7.0o往上述培养基中加入2%的琼脂粉即为固体培养基。1.2方法1.2.1氯氧菊酯降解菌的分离纯化称取污泥5g,加入灭菌的装有200mL去离子水的三角烧瓶中，170r/min>30°C,在摇床上振荡1周，充分释放污泥中的微牛物［4］，然后将上清液5mL和曝气池液体5mL加入到含氯氧菊酯浓度
7、为50mg/L的100mL液体基础培养基中，在摇床上30°C、170r/min培养。按3%的接种量，每7d转接1次，每转接1次氯氧菊酯浓度提高50mg/L,直到氯氧菊酯浓度为250mg/Lo交替使用乙醇和正己烷溶解氯氧菊酯以消除溶剂对试验的干扰，确保筛选出的菌株能够利用氯氧菊酯农药作为惟一碳源、氮源生长。取菌液按100,10-2,10-4,10-6进行做4个梯度的稀释（每个梯度设3个重复）后涂布于含氯氧菊酯的固体基础培养基平板上，于30°C培养箱中培养。待长出菌落后，按照菌落形态、大小、颜色不同挑取单菌落在含氯氧菊酯的固体基础培养基平板上划线分离
8、，纯化菌株，直到得到单一、均匀的单菌落。1.2.2紫外分光光法初步鉴定高效降解菌株将筛选得到的牛长良好的单菌落接入3mL液体富集培养基中
