氯氰菊酯降解菌的分离鉴定及其降解特性研究.doc

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1、氯氰菊酯降解菌的分离鉴定及其降解特性研究【摘要】目的分离得到能高效降解氯氰菊酯的菌株。方法采用选择性培养基从农药厂的污泥中进行富集和分离筛选高效菌株，并且用16SrDNA序列分析法和其生理生化特征对其进行鉴定。结果该菌株鉴定为克雷伯氏菌属(Klebsiellasp.)，命名为Klebsiellasp.J2（登录号为AY989899），菌株J2能以氯氰菊酯为唯一碳源进行生长，降解氯氰菊酯的最适温度是35℃,最佳pH是7.0。结论菌株J2是一株能高效降解氯氰菊酯的菌株。【关键词】氯氰菊酯；克雷

2、伯氏菌；生物降解　　　　Abstract:ObjectiveToisolateabacterialstrainJ2capableofdegradingcypermethrinfromsludgeofapesticidemanufacturer.MethodsAdoptingselectiveculturetoscreenandisolatethecypermethrindegradingstrainfromthesamplesandidentifyingthestrainbyusingthe

3、16SrDNAsequenceanalysisanditstaxonomiccharacteristics.ResultsThisbacterialstrainwasidentifiedasKlebsiellasp.namedJ2.Itcouldgrowwithcypermethrinassolesourceofcarbon.TheoptimaltemperatureandpHofcypermethrindegradationbytheorganismwere35℃and7.0.Conclus

4、ionThebacterialstrainJ2effectivelydegradecypermethrin.　　Keywords:cypermethrin；Klebsiellasp.J2；biodegradation　　随着20世纪80年代无机盐农药和有机氯农药的相继禁用，菊酯类农药已发展为我国现阶段使用最广泛的农药之一，由于具有广谱、内吸、触杀等高效杀虫特性，因此广受农业生产者欢迎。但是，大量使用引起的农药残留不仅造成环境与食品的污染，而且影响农产品的质量及人们的身体健康。农药残留及其废水

5、的降解主要有微生物降解、化学降解和光降解等方式。与其他的降解方式相比，微生物降解具有操作简单、降解彻底、无二次污染等优点。因此利用微生物技术处理农药残留，并对受污染的土壤与水体进行生物修复是一种行之有效的方法。目前对有机磷和有机氯等农药的微生物降解的研究比较多，而关于菊酯类农药的降解研究较少。本文从农药厂的污泥中采集土壤样品，筛选分离到一株能高效降解氯氰菊酯的菌株（J2），并对其进行筛选、鉴定及降解性能的初步研究［13］。　　1材料与方法　　1.1培养基　　富集培养基（1L）：蛋白胨10g、

6、NaCl2.0g、KH2PO41.5g、葡萄糖1.0g、dH2O1000mL，pH值7.0；经115℃，灭菌20min。基本培养基（1L）：NH4Cl61.0g，KH2PO40.5g，K2HPO41.5g，MgSO40.2g，NaCl0.5g，加入氯氰菊酯作为唯一碳源，浓度视需要添加。LB液体培养基（1L）：蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl5g，pH值7.0（固体加2%的琼脂粉）。　　1.2实验试剂　　氯氰菊酯（质量分数95%）原药和标准品（质量分数99.9%，色谱纯）购自成都化学试剂公司

7、；TaqDNA聚合酶与各种限制性内切酶均购自大连宝生物；3SDNAGelPurificationkitV3.1购自上海申能博彩生物科技有限公司；PCR引物由上海博亚合成；pMD18T载体试剂盒购自大连宝生物。　　1.3降解菌株的富集和分离　　将采集的农药污染土样配制成15%的悬浮液，以5%的接种量接到含25mg/L氯氰菊酯的富集培养基中，并加适量玻璃珠，37℃、160r/min振荡培养。待菌长出后，取1mL菌液接入同样培养基中37℃培养，传代过程中氯氰菊酯的浓度逐步增高至300mg/L,大约2

8、d传代1次。将富集的农药降解菌菌液用无菌水作10倍梯度（10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6）稀释，分别取0.2mL悬液涂布在含有50mg/L氯氰菊酯的无机盐固体培养基上，37℃培养；当平板出现菌落时，将单菌落在无机盐农药平板上划线分离、纯化菌株。将生长快、菌落规则、传代稳定的单菌落斜面保存。将初筛纯化的斜面单菌落接入含有50mg/L氯氰菊酯的无机盐液体培养基,37℃、160r/min培养2d，测定其降解率。　　1.4菌株的鉴定　　菌株的形态及生理生化特性参照文献［4,5］