根霉原生质体一次基因改组选育高酶活力菌株研究【毕业论文】

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1、本科毕业设计（20__届）生物技术根霉原生质体一次基因改组选育高酶活力菌株研究摘要对两种真菌的灭活原生质体融合后代进行进一步的研究，经人工培养多代后观察菌株的形态特征、部分生理生化特性分析，根霉生长较快，且比较密集，融合后代菌毛很多；融合后代的根部特征产生匍匐枝，匍匐枝末端长有假根，趋向于根霉。通过Quantityone软件分析得到融合后代更趋近与亲本根霉。本实验对亲本根霉、一代融合根霉1号、根霉2号和根霉3号进行传代培养。并对一、三、五代、九代、十一代以及亲本在生长时的形态特征进行观察分析，且测了蛋白酶与淀粉酶的活力，最后对其进行SDS电泳分析。结果表明亲本和其杂

2、交后代在培养基上生长都一般旺盛，菌体形状颜色都比较相似，但后代酶活普遍都高于亲本，例如：通过测量透明圈的方法，得出淀粉酶活力中亲本根霉透明圈比为1.75而五代透明圈比则只有2.086。用Tris对菌丝提取蛋白质后进行电泳，发现后代的条带大多比亲本多，说明后代与亲本存在一定差异。关键词：根霉；原生质体；SDS电泳ABSTRACTInactivationofthetwofungibyprotoplastfusionprogenyoffurtherstudy,afterseveralgenerationsofartificialculturestrainswereobse

3、rvedmorphological.AnalyzedbyQuantityonesoftware,moregenerationsareintegratedwiththeparentRhizopus.InthisstudyofparentalRhizopus,Rhizopusgenerationoffusion1,2andRhizopusRhizopusweresubcultured3.Andone,threeorfive,ninegenerations,tengenerationsandtheparentsingrowthwasobservedwhentheanaly

4、sisofmorphologicalcharacteristics,andmeasuringtheproteaseandamylase,andfinallyitsSDSelectrophoresis.TheresultsshowedphysiologicalandbiochemicalcharacterizationofRhizopusgrewfaster,andmoreintensive,theintegrationfimbriaemanygenerations;therootsofconvergencecharacteristicsofoffspringprod

5、ucedstolons,stolonswithrhizoidsendofalong,tendtoRhizopusthatparentsandtheiroffspringaregenerallyinstronggrowthmedium,thecellshapeofcoloraremoresimilar,buttheoffspringaregenerallyhigherthantheparentalactivity,suchas:themethodbymeasuringtheclearzoneobtainedintheparentalamylaseactivityRhi

6、zopusclearzonewas1.75andtheFiveDynastiesandtransparentthanthecirclethanonly2.086.MycelialproteinsextractedwithTrisafterelectrophoresis,thebandsaremostlyfoundinoffspringthanparentsandmoregenerationsandtheparentsthattherearesomedifferences.KeyWords:Rhizopus;Protoplasts;SDSgelelectrophore

7、sis目录1前言11.1研究现状11.2本实验的研究目的与意义12材料与方法22.1材料、试剂和设备22.1.1材料22.1.2主要化学药品与试剂22.1.3主要仪器与设备22.1.4主要溶液试剂及配制32.1.5其他用品32.2方法32.2.1菌株活化32.2.2菌丝体培养42.2.3原生质体制备42.2.4原生质体融合52.2.5传代培养52.2.6菌种蛋白酶和淀粉酶活力的测定52.2.7SDS电泳的方法53结果与分析63.1后代形态分析63.2不同菌种的蛋白酶和淀粉酶的活性测定和比较83.3SDS电泳163.3.1扫描图163.3.2蛋白质定量163.3.